Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.
Скачать (прямая ссылка):
Альбумин. Мутантные варианты альбумина человека впервые описал Шёр-лен [1129]. Помимо обычной зоны альбумина была обнаружена одна зона со сниженной электрофоретической подвижностью. Позднее была доказана семейная природа этой редкой вариации, а также был 'выявлен ряд других вариантов. В популяции европейцев большая часть вариантных форм мигрирует медленнее, чем основные формы, однако найдены и такие варианты, которые обладают более высокой подвижностью. Поскольку мутантные гены встречаются в популяции сравнительно редко, большинство индивидуумов с этим 'признаком являются гетерозиготам'и. Тем не менее описана и гомозиготная форма [136].
Первые исследования, посвященные вариантам альбумина, проводились методом электрофореза на бумаге [1129]. Затем выяснилось, что для этой цели больше подходит ацетат целлюлозы [859, 1281]. Был также tc успехом использован желатинизированный ацетат целлюлозы (целлогель) [817].. Агаровые и агарозные гели [1416, 1417] оказались пригодными для анализа быстро и медленно мигрирующих вариантов альбумина (рис. 105). С 'помощью электрофореза в агарозном геле был обнаружен необычный вариант альбумина [444]. Присутствие этого компонента приводило к расширению зоны альбумина вплоть до зоны cci-глобулинов. В таких сыворотках наблюдалось более высокое содержание димеров альбумина, что^ указывало на повышенную способность этого белка к димери-зации. Электрофорез вариантов альбумина, как правило, проводится в тех же условиях, что и обычный электрофорез суммарных белко® (плазмы. При электрофорезе в крахмальном геле следует применять буферные системы, ограничивающие ширину зоны альбумина. Используют также [433] и неоднородную»
Рис. 105. Различные электрофоретические формы альбумина человека, выявляемые путем электрофореза в агарозном геле [742]. 1 — нормальная плазма; 2— альбумин с повышенной анодной подвижно* стью, возникающий после лечения больных пенициллином; 3 — наследственный? вариант альбумина, обнаруживаемый па-расширению альбуминовой зоны в сторону катода; 4 — наследственный вариант альбумина («бисальбуминемия»); 5 — быстрый альбумин, характерный для ги~ пербилирубинемии.
систему Паулика [1028]. Уэйткемл и др. [1397] рекомендуют две другие буферные системы с pH 4,95 и 6,4. Блумберг и др. [136] сообщили об успешном разделении вариантов альбумина в неоднородной буферной системе Аштона и Брейдена [65]. Выяснилось, что у некоторых 'видов животных одни фенотипические 'варианты встречаются чаще, чем другие. Полиморфизм альбумина у крупного рогатого скота характеризуется тем, что ¦частота встречаемости разных вариантов за-висит от породы. Три основных фенотипа контролируются двумя аллелями. Кроме того, обнаружено по меньшей мере еще два редких мутантных аллеля [64, 66, 150]. Описан также полиморфизм альбумина у домашних птиц [851].
Кислый ai-гликопротеид (орозомукоид; система Gp). Генетически детерминированные варианты этого белка можно разграничить путем электрофореза после отщепления от обоих углеводных компонентов большинства остатков сиаловой кислоты с помощью нейраминидазы [1132] или мягкого кислотного гидролиза [597]. В более ранних работах применяли электрофорез в крахмальном геле по крайней мере частично очищенного белка. Электрофорез проводили при pH 5,0 в 0,02 М нат-рий-ацетатном буфере [597, 1132]. При использовании моно-специфических антител против кислого сц-гликопротеида его фенотип можно установить и без предварительного выделения белка. Джонссон и др. [642] описали получение специфической "иммунной сыворотки и методику тестирования фенотипов оро-зомукоида в цельной сыворотке. Небольшое количество сыворотки обрабатывают нейраминидазой и проводят электрофорез по методу Альпера и др. [31] в слое агарозного геля толщиной 1 мм в вероналовом буфере (pH 8,6; ионная сила 0,05), содержащем 1,8 мМ лактат кальция. Электрофорез заканчивают после того, как гемоглобин А проходит 2,5 см от линии нанесения. Зоны орозомукоида обнаруживают с помощью иммуно--фиксации [27] (см. гл. II.4). В той же лаборатории был успешно применен перекрестный иммуноэлектрофорез [642]. Электрофорез в первом направлении проводили в слое комбинированного полиакриламидно-агарозного геля [1324] при pH 5,0. Двумя указанными методами было показано, что существуют два электрофоретически различных варианта орозомукоида, которые наследуются как аутосомные доминантные признаки [642].
а\-Антитрипсин (система Pi). Полиморфизму этого белка посвящены многие исследования. В настоящее время считается, что существует не менее семи аллелей, но в европеоидной популяции преобладает фенотип Pi ММ. По данным Купперса [724], два аллеля Pis и Piz сопряжены со сниженной концентрацией cti-антитрипсина в крови. Физиологическое и патологиче-
FF
jL
jL
FS
FM 1M
MM
IS
MZ
_A
ss
ik.
A.
zz
*xz I
Ml/ MX
Яас. 106. Различные типы агантитрипсина, выявляемые при электрофорезе в неоднородном крахмальном геле в сочетании с последующим электрофорезом в агарозном геле, содержащем антитела [356]. Л — альбумин.
