Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
В течение ряда лет в лаборатории д-ра Эрла в Бетес-де разрабатывали различные варианты среды химически определенного состава. Одна из них, среда NCTC 109 (табл. 1.6) [79], поддерживает рост ряда линий нормальных и злокачественных клеток, выделенных от различных видов (мышь, человек, хомячок, обезьяна и др.). Эта среда значительно упрощена за счет того, что из ее состава исключены почти половина используемых в других средах витаминов, все коферменты, восстановители и источники липидов [80]. Многие клеточные линии растут на этой упрощенной среде, но иногда необходимо Добавлять к ней инозитол и реже витамин В12.
В табл. 1.7 сравниваются среды химически определенного состава, о которых говорилось выше. Многие из
Таблица 1.4
Состав среды 199 (мг/л)
(в скобках приведены эквиваленты для аминокислот, выраженные в мМ)
Аминокислоты
L-аяадин1
L-аргииин, гидрохлорид L-аспараги'Н-овая кислота1 L-цистин
L-глутаминовая кислота1
L-глутамин
Глицин
L-гистидин, гидрохлорид
L-окешгролин
L-язолейцин1
L-лейщгн1
L-лизин
L-метионин1
L-фенилаланин1
L-пролин
L-серии1
L-треонин1
L-триптофан1
L-тирозин
L-вал'ИН1
Витамины п-Амянобензойная кислота Биотин
Пантотеиат кальция
Холинхлорид
Фолиевая кислота
Инозитол
Ниацин
Никотинамид
Пврядокеаль, гидрохлорид
Пиридоксин, гидрохлорид
Рибофлавин
Тиамин, гидрохлорид
Витамин А
Витамин D
Витамин Е
Витамин К
Коферменты АТФ Восстановители Аскорбиновая кислота L-цистеии, гидрохлорид Глутатион
25.0
70.0
30.0
20.0
75.0 100,0
50.0
20.0 10,0 20,0 60,0
70.0
15.0
25.0
40.0
25.0
30.0
10.0
40.0
25.0
(0,30)
(0,40)
(0,25)
(0,75)
(1,00)
(0,07)
(0,70)
(0,10)
(0,75)
(0,15)
(0,45)
(0,20)
(0,20)
(0,15)
(0,35)
(0,25)
(0,25)
(0,005)
(0,20)
(0,20)
0,05 0,01 0,01 0,5 0,01 0,05 0,025 0,025 0,025 0,025 0,01 0,01 0,10 0,10 0,01 0,01
10,0
0,05
0,1
0,05
1 В первоначальной пропнсн двойные количества DL-амннс,-кнслот.
Предшественники нуклеиновых
кислот
Аденин 10,0
Г уанин 0,3
Гипоксантин 0,3
Тимин 0,3
У.рацил 0,3
Ксантин 0,3
Адениловая кислота 0,2
Источники липидов
Холестерин 0,2
Твин 80 5,0
Источники углеводов (кроме 0,5
глюкозы)
2-дезакси-0-р«боза
D-рибоза 0,5
Ацетат натрия 50,0
Соли
NaCl 6800,0
КС1 400,0
СаСЬ 200,0
MgS04-7iH20 200,0
N,aH2P04 140,0
N-аНСОз 2200,0
Fe(N03)3-9H20 0,1
Глюкоза 1000,0
этих сред черезвычайно сложны и число компонентов в них варьирует от 72 до 41. Таким образом, примерно через пятьдесят девять лет после первых работ Льюис М. И Льюиса У. [74] удалось добиться роста клеток в среде с точно известным химическим составом. Тщательность приготовления и хранения сред, а также степень очистки реактивов имеют очень большое значение для культивирования клеток.
ПОДДЕРЖИВАЮЩИЕ СРЕДЫ
Эти среды предназначены главным образом для сохранения клеточных культур в хорошем состоянии в течение нескольких недель, так чтобы свойства клеток,
Таблица 1.5 Состав среды Вэймаут 752/1 (мг/л)
(в скобках приведены эквиваленты для аминокислот, выраженные в мМ)
Аминокислоты
L-аргинин, гидрохлорид 75,0 (3,6)
L-асггарагиновая кислота 60,0 (4.6)
L-цистин 15,0 (0,06)
L-глутаминовая кислота 150,0 (10,2)
L-глуташш 350,0 (23,8)
Глицин 50,0 (6,6)
L-гистидии 150,0 (8,0)
L-изолейцин 25,0 (1,9)
L-лейцин 50,0 (3,8)
L-лкзин 240,0 (14,2)
L-метионин 50,0 (3,4)
L-фенилаланин 50,0 (3,0)
L-пролин 50,0 (4,4)
L-треокин 75,0 (6,4)
L-триптофан 40,0 (2,0)
L-тирозин 40,0 (2,2)
L-валин 65,0 (5,5)
Витамины
Биотлн 0,02
Холинхлорид 250,0
Паитотенат кальция 1,0
Фолиевая кислота 0,4
Инозитол 1,0
Никотинамзд 1,0
Пиридоксин, гидрохлорид 1,0
Рибофлавин 1,0
