Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
3. Клетки ресуспендируют в 3 мл среды.
4. 1 мл клеточной суспензии помещают в пробирку Лейтона, а оставшиеся 2 мл — во флакон Карреля при 37°С в атмосферу с 5% СОг на 6 сут.
5. На 7-е сут среду из обоих сосудов осторожно сливают в стерильную центрифужную пробирку. К клеткам добавляют свежую среду, а слитую надосадочную жидкость центрифугируют в течение 10 мин при 100 об/мин. Клетки, которые не осели, помещают в пробирку Лейтона и используют для получения еще одной культуры.
6. На 14—21-е сут, когда эпителиоидные клетки займут площадь около 200 мм2, одну из культур обрабатывают колхицином для накопления метафаз. Когда в оставшихся культурах число клеток достигнет определенной величины, получают субкультуры, которые затем используют для биохимического и дополнительного цитогенетического исследования.
Для получения препаратов хромосом первичные культуры обрабатывают так же, как и культуры фибро-бластов (гл. 7).
Однако обычно клетки с поверхности, на которой они растут, снимают более концентрированным раствором трипсина (0,25%), а иногда для этой цели необходимо пользоваться стеклянным скребком. Полученную кле-
Рис. 9.2. Метафязная пластинка, полуденная после обработки колхицином культуры клеток амниотической жидкости на 2-й день инкубации (Май-Прюнвальд—Гимза, 500 X ).
ш
нк ЛЬ ли XX ЛЯ КХ НА
X X
N V V/
sS'ntK ЛЛ #ЧЛ ** ** ЛА X* ХЛ
W
Рс. 9.3. Кариотип клетки, изображенной на рнс. 2, представленный согласно Денверской классификации.
Стрелки указывают транслокацию части хромосомы АЗ на короткие плечи одной из хромосом группы D. Анализ кариотипа указывает, что пол плода женский в что плод имеет сбалансированную хромосомную аномалию. / — группа А (1—3); // — группа В (¦—5); Ш — группа С (в—111; IV— группа D (13—15); V —группа Е (16—18); V/ —группа F (19—10); V// — группа G
(21-22).
точную суспензию обрабатывают гипотоническим раствором, фиксируют, окрашивают и анализируют точно так же, как и суспензию фибробластов. Число клеток, получаемых из первичной культуры клеток амниотической жидкости, значительно меньше, чем из однослойных культур фибробластов первого или второго пересевов. Поэтому следует очень осторожно обращаться с культурой при центрифугировании и пипетировании, чтобы избежать потери клеток. Препараты хромосом, приготовленные с помощью этого метода, по своему качеству не уступают препаратам хромосом из культур лимфоцитов и фибробластов, что чрезвычайно важно при выявлении аномалий в структуре хромосом (рис. 9.2 и 9.3).
ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Creaseman W. Т., Lawrence R. A., Thiede Н. A., J. Am. med. Ass., 204, 949 (1968).
2. Wa’hlstrom J., Brosset A., Bartsch F., Lancet, ii, 1037 (1970).
3. Lind T„ Hytten F. E., Lancet, i, 1147 (1970).
4. Wachtel E., Gordon H., Olsen E., J. Obstet. Gynaec. Br. Coramonw , 76, 596 (1969).
5. Potter E. L„ Pathology of the Fetus and Infant, 2nd edn, Year Book Medical Publishers Inc., Chicago, 1961.
6. Volta R. A., Bobrow De Gagneten C., Parada O., Giulietti М., Am. J. Obstet. Gynec., 102, 571 (1968).
7. Pertoft H., Back O., Lindahl-Kiessling K-, Expl Cel! Res., SO, 365 (1968).
8. Fuchs F., Ris P., Nature, Lond., 177, 330 (1966).
9. Fuchs P., Philip /., Nord. Med., 69, 572 (1963).
10. Steele M. W., Breg W. R., Lancet, I, 383 (1966).
11. Jacobson С. B., Barter R. H,, Am. J. Obstet. Gynec., 99, 796 (1967).
12. Nadler И. L., Pediatrics, 42, 912 (1968).
13. Santesson B., Akesson H. O., Book J. A., Brosset A., Lancet, ii, 1067 (1969).
14. Gregson N. М., Lancet, i, 84 (1970).
15. Nelson М. М., Emery A. E. H., Br. med. J., 1, 523 (1970).
16. Nadler H. L., Gerbie A. B., New Engl, J. Med., 282, 596 (1970).
17. Rubin H., Rein A., Growth Regulating Substances for Animal Cells in Culture, p. 51, Wistar Institute Press, Philadelphia, 1967.
18. Gogh Lund R. O., Proc. Soc., wxp. Biol. Med., 94, 532 (1957).
19. Lee C. L. Y., Gregson N. M„ Walker S., Lancet, ii. 316 (1970).
ОГЛАВЛЕНИЕ
Предисловие к русскому изданию................................
Предисловие редактора английского издания . . . .
Глава 1. Среды для культивирования клеток млекопитающих
А. Витакер ................................................
Общие замечания..........................................
Практические рекомендации................................
Сбалансированные солевые растворы . . .
Ростовые среды...........................................
Естественная среда.....................................
Среды, состоящие из естественных компонентов и химиче
ски определенных веществ ..............................**
Среды с определенным составом.........................22
Поддерживающие среды.....................................27
Выбор среды..............................................32
Цитируемая литература.................................. 34
