Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
2. Tjio I. H., 'Whang ]., Stain Technol., 37, 17 (1962).
3. Moorhead P. S.. Nowell P. C., Mettman W. Batiips D. М., Hun-gerford D. A., Expl Cell Res., 20, 613 (1960).
4. Puck Т. T„ Cieciura S. }., Robinson A., J. exp. Med., 108, 945 (1958).
5. Harnden D. G., Br. J. exp. Path. 41, 31 (1960).
6. Hyman J. М., J. med. Lab. Technol., 25, 81 (1968).
7. Poulding R. H., Progress in Medical Laboratory Technique, vol. 4, Butterworth. London, 1968.
8. Paul J., Cell and Tissue Culture, 2nd edn, Livingstone, Edinbourgh, 1960
9. Hirschkorn K., Cooper H., Am. J. Med., 31, 442 (1961).
10. Edwards J. H., Lancet, i, 496 (1960).
It, Fraccaro М., Kaijser K-. Lindsten I., Ann. hum, Genet., 24, 45
(I960).
12. Hsu Т. C., Kellogg D. S.. J. natn Cancer Inst., 25, 221 (1960).
13. Evans V. J., Earle W. R., J. natn Cancer Inst., 8, 103 (1947).
14. Sinclair W. K„ Morion R. A., Nature, Lond., 199, 1158 (1963).
15. Froland A., Acta path, microbiol, scand., 53, 319 (1961).
16. Tjio J. H„ Puck T. T„ J. exp. Med., 108, 259 (1958).
17. Hungerford D. A., Stain Technol., 40, 333 (1965).
18. Rotfqels К. H., Siminovitch L., Stain Technol., 33, 73 (1958).
19. Denver Study Group (1960), Lancet, i, 1063 (I960).
20. London Conference (1963), Cytogenetics, 2, 264 (1963).
21. Chicago Conference (1966), Birth defects: Original article series,
II, 2, The National Foundation, New York, 1966.
Глава 8
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ К ОДНОСЛОЙНЫМ КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ
Ш. ХАДСОН
Department of Clinical Virology, St. Thomas’s Hospital, London
ВВЕДЕНИЕ
В этой главе изложены принципы метода флуоресцирующих антител, причем особое внимание уделено его использованию применительно к культуре ткани и методам диагностики вирусных заболеваний. Мы не будем останавливаться на всех вариантах метода флуоресцирующих антител, предназначенных для исследования индивидуальных вирусных систем, однако в качестве введения предпошлем краткое изложение тех успехов, которые были достигнуты в области быстрой диагностики.
Техника флуоресцирующих антител была впервые применена Кунсом и др. [1] для обнаружения антигена пневмококка. С тех пор она широко используется для обнаружения как бактериальных, так и вирусных антигенов. Раньше использование ее было в основном ограничено научными исследованиями, но в последнее время она находит все более широкое применение для быстрой диагностики многих заболеваний. Эту методику можно использовать для определения антигена с помощью специфической антисыворотки, а также для обнаружения специфических антител с помощью известного антигена. В данной главе рассмотрено только первое возможное применение методики.
Как диагностическое средство этот тсст име:т особенно большое значение в тех случаях, когда антиген можно непосредственно обнаружить в пробах, полученных от больного, в частности в клетках, взятых из гортани, полости носа или содержащихся в моче. Приведем несколько примеров. Лью [2] выявил антиген вируса
гриппа Л и с.мыиах со слизистой из полости носа, а Хере [3]—в мокроте; Лланде-Родас и Лью [4] диагностировали корь при исследовании эпителиальных клеток в осадке .мочи. Гарднер .н Мак-Квиллан [5] определяли антиген RSV в эпителиальных клетках носоглоточного секрета. Антиген вируса краснухи обнаружен в клетках мазков, взятых из зева.
Установить диагноз, руководствуясь данными, полученными при анализе проб, взятых из организма, возможно не всегда: во-первых, количество клеток для анализа может быть недостаточным; во-вторых, содержать антиген может лишь небольшая часть их. Поэтому желательно, получив пробы, частью их инфицировать культуры тканей. Затем через определенный промежуток времени, .продолжительность которого зависит от скорости размножения вируса и особенностей выбранной клеточной системы, в этих клетках с помощью методики флуоресцирующих антител выявляют антиген. Эту методику успешно применяли Мак-Квиллан и Гарднер [7], обнаружившие RSV на ранних стадиях его размножения.
Прежде чем познакомить читателя с самой техникой обнаружения вирусного антигена в культурах тканей, приведем перечень необходимых материалов и опишем методы их получения; укажем также на некоторые трудности, которые могут встретиться в работе, и способы их преодоления.
Наиболее широко применяются дна метода флуоресцирующих антител: прямой метод Кунса и др. [1] и непрямой метод Веллера и Кунса [8].
1. прямой метод
Сущность прямого метода сводится к следующему. К сыворотке, содержащей специфическую у-глобулино-вую фракцию, добавляют флуоресцирующий краситель; продукт, образующийся в этой реакции, называют конъюгатом. Его наносят на ткань, в которой имеется фиксированный антиген, и инкубируют в течение 30—60 мин при 37 С во влажной камере. Затем избыток красителя смывают и погружают препарат в фосфатный со-
левой буфер не менее чем на 30 мин. За это время буферный раствор несколько раз меняют, чтобы полностью отмыть ткаяь от конъюгата, не связанного с антигеном.
