Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фридлянской И.И. -> "Новые методы культуры животных тканей" -> 63

Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.

Фридлянской И.И., Олева Ю.В. Новые методы культуры животных тканей — М.: Мир, 1976. — 255 c.
Скачать (прямая ссылка): noviemetodikulturi1976.djvu
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 80 >> Следующая

32. Mazur P., in Low Temperature Research in Biology, Ed. Merryman H. Т., Academic Press, London, 1966.
33. Nagginton J., Greaves R. /. N., Nature, Lond., 194, 4832 (1962).
34. Pegg A., Trotman C. E.} J. clin. Path., 12, 477 (1959).
35. Wasley GMay L W., Animal Cell Culture Methods, Blackwell, Oxford, 1970.
36. Branson W. RMcGinnis М. H., Blood, 20, 478 (1962).
Глава 7
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ХРОМОСОМ
Дж. ХАИМЭН и А. ПОЛДШ-Г Department of Pathology, Southmead Hospital, Bristol
ВВЕДЕНИЕ
Анализ кариотипа клеток кроветворной и соединительной ткани человека представляет собой весьма важную диагностическую процедуру при полном цитогенетическом исследовании больных, у которых по клиническим данным предполагаются хромосомные аномалии. В отличие от относительно простого способа получения 2—3-дневных культур лимфоцитов крови (наиболее широко используемый источник клеток для хромосомных исследований) культивирование фибробластов — более сложная процедура, включающая длительный период (несколько недель), в течение которого получают соответствующую клеточную популяцию, достаточную для проведения исследования. Длительное культивирование, трудности, связанные с ростом клеток в культуре, варьирующим у разных больных,— все это ограничивает применение метода культивирования фибробластов в целях диагностики.
Методы получения достаточного количества мета-фазных клеток человека делят на 3 группы (в зависимости от типа .исследуемых клеток). К первой относятся методы, не требующие больших затрат времени,— это кратковременное культивирование костного мозга из грудины или гребня подвздошной кости; препараты из этого материала можно приготовить менее чем через 24 ч, не применяя агенты, вызывающие митозы [1, 2]. Ко второй группе относятся методы, связанные с пролиферацией, бластоподобных клеток из зрелых лимфоцитов крови, селезенки, лимфатических узлов и т. д. В этом случае для стимуляции митозов добавляют фи-
тогемагглютинин [3]; опыт длится 48—72 ч. И наконец, третья группа методов связана с длительным культивированием фибробластов из плотных тканей, таких, как кожа, без применения агентов, индуцирующих митоз. Методы выращивания фибробластов или фибробласто-подобных клеток в свою очередь подразделяются на
2 группы в зависимости от способа инициации первичной культуры: либо из клеточной суспензии, получаемой механически или трипсинизацией исходного материала [4], либо из кусочка ткани, предварительно заключенного в сгусток [5]. Ниже приведен метод получения метафазных пластинок из соединительной ткани человека; этим методом, основанным главным образом на ранее описанных методах [6, 7] с некоторыми модификациями, пользуются в лаборатории авторов.
ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ЛАБОРАТОРИИ И АППАРАТУРЕ
Как в любом случае длительного культивирования, успешное поддержание культуры фибробластов пересевами в течение нескольких недель или больше зависит от соблюдения правил асептики, что предотвращает попадание микроорганизмов в культуры. Работу с фибро-бластами можно проводить в помещении, используемом для других лабораторных работ, но при этом повышается вероятность заражения культур. Антибиотики, которые добавляют в основную ростовую среду, лишь частично обеспечивают защиту от случайно попадающих микроорганизмов. Для успешной работы с культурами фибробластов основным требованием является наличие отдельного помещения, стены которого и рабочая поверхность стола должны легко мыться. Необходим также простой бактериологический колпак. Важно помнить, что большая часть материала, получаемого для хромосомного анализа, невосполнима, поскольку не всегда возможно провести повторную операцию у больного. По этой причине для проведения предполагаемых цитогенетических исследований на фибробластах необходимо обеспечить отдельное удобное помещение.
Из лабораторного оборудования, которое требуется для культивирования фибробластов, необходимы термо-
стат, водяная баня, инкубатор, холодильник, 2 специальных газовых баллона, инвертированный микроскоп и центрифуги.
Термостат
Весьма важно, чтобы в выбранном термостате поддерживалась постоянная температура, равная 374=0,5 °С, и чтобы эта температура сохранялась по всему объему термостата. Термостат LEEC Precision Incubator, выпускаемый фирмой Laboratory and Electrical Engineering Company (Colwick, Estates, Nottinqham), обеспечивает стабильную температуру с минимальными отклонениями и имеет автоматическое отключение в случае перегрева.
Водяная баня
Для нагревания среды и размораживания реактивов удобна стандартная водяная баня с внутренними размерами 13X10X6 см, в которой поддерживается постоянная температура.
Инкубатор
Эмбриональный экстракт получают из 10-дневных куриных эмбрионов, поэтому необходим небольшой инкубатор или брудер. Относительно недорог и прост в обращении Curfew electric observation incubater (Curfew Appliances Ltd., Ottershaw, Chertsey Surrey), в котором может одновременно помещаться 60 яиц. Уход за инкубатором сводится в основном к поддержанию нужной влажности, для чего следует лишь регулярно подливать воду в подносы.
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 80 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed