Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
L-валин
Витамины
Холинхлорид 1 1
Фолиевая кислота 1 1
Инозитол 2D 2
Никотинамид 1 1
Пантотеиат кальция 1 1
Плридоксаль, гидрохлорид 1 1
Рибофлавин 0,1 0,1
Тиамин 1 1
Соли (сбалансированный солевой 6800 6800
раствор Эрла) 400 400
NaCl 200 200
КС1 200 200
СаСЬ 150 150
MgS04-7Hz0 2000 2000
NaH2P04-2H20
NaHC03
Глюкоза 1000 1000
В состав среды часто добавляют биотин в количестве 1,0 мг/л.
1) Является частым компонентом поступающих в продажу сред, хотя н не включен в пропись, первоначально предложенную Иглом,
Ностью не выяснена, хотя она и является очень важным компонентом сред для культивирования клеток. Высказываемые по этому поводу мнения противоречивы. Кажется весьма вероятным, что важную роль играют низкомолекулярные питательные вещества, связанные или адсорбированные сывороточными белками. В результате диализа способность сыворотки обеспечивать рост клеток может исчезнуть [42, 44, 45], однако она восстанавливается при добавлении протеозного пептона (0,1%) [46]. Эта способность не восстанавливается при добавлении витаминов, предшественников нуклеиновых кислот или аминокислот. Следовательно, активным началом в данном случае служат пептиды, что и было подтверждено в дальнейшем Пизом и др. [47]. Однако имеются указания, что аминокислоты, адсорбированные белками, все-таки играют какую-то роль, поскольку, как было обнаружено, при добавлении больших количеств сыворотки к среде, которая во всех других отношениях оказывается дефицитной, концентрация аминокислот становится достаточной для достижения порогового уровня выживаемости [48]. Полагают, что липиды составляют еще одну группу низкомолекулярных соединений, весьма важных для роста клеток [49—51].
По некоторым данным, высокомолекулярные фракции сыворотки также играют важную роль в питании клеток [52]. К таким фракциям относят альбумин [53] и а- и (5-глобулины [54—56]. Однако по крайней мере одна группа исследователей считает, что сывороточные белки не распадаются и не включаются в клетки [57]. По-видимому, роль высокомолекулярных соединений совсем иная. Возможно, они выполняют защитную функцию, предохраняя клетки от механических повреждений [56 58, 59] или' действуя как детоксицирующие агенты [60]. Норкин и др. [51] показали, что альбумин в среде проявляет наибольшую эффективность в том случае, когда из среды экстрагирована большая часть связанных с ним низкомолекулярных соединений. Освободившиеся носле экстрагирования участки связывания в молекуле альбумина могут присоединять токсические вещества, находящиеся в среде. Помимо всего сказанного выше, сыворотка способствует также прикреплению клеток к
субстрату, в частности к стеклу [56, 61, 62], и распластыванию по нему. Это, вероятно, обусловлено изменением заряда на поверхности стекла [63, 64]. Фракция, вызывающая это изменение, не известна, но почти наверняка имеет отношение к а-глобулинам [65]. Активным началом ее считают гликопротеид фетуин, однако обнаружен и другой белок [67], неидентичный фетуину. Не так давно Уоллисом и др. [68] была высказана мысль, что роль сыворотки в среде сводится к торможению действия протеолитических ферментов. Эти авторы считают, что сыворотка необходима для инактивации трипсина, остающегося после ферментной дезагрегации клеток, а также протеаз, синтезируемых клетками. Уоллис и др. предположили, что так называемая токсическая сыворотка просто содержит мало или вовсе не содержит такого антиферментного компонента и что «инактивация» снижает его концентрацию, а следовательно, и «ростовые» качества сыворотки. Какую же из этих разнообразных функций на самом деле выполняет сыворотка, а также значение каждой из них предстоит еще выяснить. Чрезвычайно сложный состав сыворотки крайне затрудняет такое исследование, но пока оно не будет выполнено, все попытки найти эффективные заменители этого природного компонента сред не могут увенчаться успехом.
СРЕДЫ С ОПРЕДЕЛЕННЫМ СОСТАВОМ
Основываясь на приведенных выше данных о роли сыворотки в среде, можно по-разному подойти к решению проблемы замены сыворотки в среде. Исходя из предположения о роли сыворотки как защитного агента, Катзута и др. [58] предложили использовать в качестве заменителей альгиновую кислоту, декстран и поливи-нилпирролидон (ПВП). Они получили штамм клеток HeLa, адаптированный к росту в среде, состоящей из сбалансированного солевого раствора, 0,1% ПВП (средний молекулярный вес 7-105), гидролизата лактальбуми-на (0,4%) и дрожжевого экстракта (0,8%) [59]. Используют также [49, 69, 70] очищенные белки, например инсулин, иногда с добавлением инертных полимеров. Неко-
