Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фридлянской И.И. -> "Новые методы культуры животных тканей" -> 52

Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.

Фридлянской И.И., Олева Ю.В. Новые методы культуры животных тканей — М.: Мир, 1976. — 255 c.
Скачать (прямая ссылка): noviemetodikulturi1976.djvu
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 80 >> Следующая

Такое подробное описание камеры было здесь дано для того, чтобы привлечь внимание ко многим ее достоинствам. Дальнейшие подробности, касающиеся применения камеры, и некоторые практические советы по работе с ней содержатся в проспектах, выпускаемых фирмой.
Камера Круикшенка, Купера и Конрана и камера Стерилина. Камера, предложенная Круикшенком и др. [30], намного проще. Принцип этой камеры в основном тот же, что и камеры Тревана и Робертса: небольшой объем культуральной среды, окруженный газовым пространством, удерживается силой поверхностного натяжения между двумя прозрачными параллельными стенками.
Исходная конструкция камеры следующая (рис. 5.6). В центральной части пластины из перспекеа размером 75X40X5 мм (что соответствует размерам столика
микроскопа) вырезают круглую полость с плоским дном диаметром 25 мм и глубиной не -более 0,75 мм. По периферии дна полости вырезают кольцевую канавку глубиной 3 мм и шириной 2,5 мм; основная часть дна полости представляет собой, таким образом, плоскую вершину короткого и толстого столбика диаметром 20 мм. Вершину столбика полируют и камеру окончательно достраивают тем, что всю полость покрывают квадратным
Рис. 5.6. Ptfcy-нок центральной части камеры Круикшенка, (Купера
и Конрана с покровным стеклом.
А. Вид сбоку. Б. Вид сверху; пунктиром показаны боковые канальцы.
покровным стеклом со стороной 38 мм, которое приклеивают к пластине пчелиным воском (парафин не подходит, так как он проницаем для культуральной среды).
Силой поверхностного натяжения среда удерживается между вершиной столбика и покровным стеклом, а окружающее кольцеобразное углубление служит газовым пространством. Для доступа к последнему, а также к пространству между покровным стеклом и вершиной столбика сквозь пластины просверлены канальцы диаметром 3 мм, находящиеся напротив друг друга.
Пластину стерилизуют кипячением. С помощью узкого цилиндрического аппликатора на поверхность пластины вокруг полости наносят расплавленный воск и на него кладут обожженное в пламени покровное стекло. Воск распределяется под покровным стеклом до края
полости; его количество должно быть таким, чтобы обеспечить надежную герметизацию.
Пользуясь шприцем с иглой, через один из канальцев вводят суспензию клеток, затем камеру заполняют газом, а отверстия канальцев затыкают тампончиками, смоченными в расплавленном воске. Первые нескользко часов камеру инкубируют в перевернутом положении, чтобы клетки осели и (прикрепились к поверхности стекла. Затем, вернув камеру в обычное положение, продолжают инкубацию. Смену среды, введение в культуру различных веществ, а также периодическое обновление состава атмосферы осуществляют через канальцы, по которым возможна также и постоянная перфузия. В последнем случае в отверстия 'канальцев вставляют маленькие резиновые пробочки, через которые проводят иглу.
Снятие с пластины покровного стекла для последующей фиксации и окрашивания клеток довольно трудно, так как затвердевший воск крошится, однагко это все же можно сделать, подводя под угол стекла бритвенное лезвие. Стекло снимается легче, если вместо «чистого» воска применять смесь из равных частей низкоплавкого парафина для гистологических исследований и пчелиного воска. Такая смесь более пластична, чем «чистый» пчелиный воск и, по-видимому, непроницаема для среды.
Достоинство такой камеры состоит в том, что ее легко изготовить в лабораторных мастерских. Недостатки ее следующие. Во-первых, по сравнению с камерой Тревана и Робертса и камерой Приора в ней труднее поддерживать стерильность, поскольку нет надежного способа повторной стерилизации входов в канальцы в собранных камерах.. Необходимо поэтому самое строгое соблюдение асептики. Все операции с использованием канальцев следует выполнять в настольном боксе, а камеру вынимать из стерильной чашки Петри только для микроскопирования. Во-вторых, материал, из которого сделана пластина, выделяет некоторые цитотоксические вещества, и для нейтрализации их эффекта приходится применять высокие концентрации сыворотки в среде, что не всегда желательно. В-третьих, толстое дно камеры (4,25 мм) ухудшает освещение даже при исполь-
зовании длиннофокусных конденсоров (более тонкие пластины деформируются при повторной стерилизации).
Камера Стерилина представляет собой усовершенствованную модификацию такой модели (Sterilin Ltd., 12 Hill Rise, Richmond, Surrey). Основные усовершенство-
r~~r
Рис. 5.7. Рисунок камеры Стерилина (без покровного стекла).
А. Вид сверху, боковые канальцы показаны пунктиром (масштаб 1:1). Б. Поперечный разрез с центральным столбиком, кольцевым газовым пространством и боковыми канальцами (масштаб 2:1). В. Продольный разрез; с обеих сторон видны площадки для прикрепления зажимов столбика микроскопа.
вания состоят в замене перспекса смачиваемым и нетоксичным пластиком — нуклоном и в создании полости под центральным столбиком, так что толщина камеры уменьшается до 1,4 мм (рис. 5.7), что улучшает ее оптические свойства. Кроме того, несколько изменены размеры пластины; длина и ширина ее уменьшены до 55 и 35 мм соответственно; покровное стекло представляет квадрат со стороной 32 мм. Толщина пластины там где находится камера, такая же (5 мм), но на расстоянии 10 мм от каждого конца она уменьшается за счет верхней части до 3,6 мм, благодаря чему пласти-
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 80 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed