Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Состав сбалансированных солевых растворов (г/л)
РОСТОВЫЕ СРЕДЫ
ЕСТЕСТВЕННАЯ СРЕДА
За исключением сыворотки, естественные среды редко поступают в продажу. Вероятно, этим и объясняется тот факт, что в настоящее время их мало используют, хотя еще недавно они применялись достаточно широко. Так, для роста клеток зародыша человека Малхерб [34] использовал среду, состоящую из аллантоисной или амниотической жидкости (90%), нормальной лошадиной сыворотки (5%) и бычьего эмбрионального экстракта (5%). Жордан [35] культивировал клетки, взятые из полости носа человека на среде, в состав которой входили гомологичная сыворотка крови человека (35%), экстракт куриного эмбриона (5%) и раствор Хэнкса (60%). В тех случаях, когда первичные клеточные культуры получают из небольших кусочков ткани, До сих пор пользуются методом заключения клеток в плазменные сгустки, т. е. коагулят, образующийся при смешивании куриной плазмы и куриного эмбрионального экстракта. Для этой цели получают свежую или высушенную замораживанием куриную плазму, которую хранят в силиконизированных пробирках.
Кроме сыворотки, к числу наиболее распространенных природных ингредиентов сред относится гидролизат лактальбумина, получающийся при ферментативном гидролизе белка молока. Ряд фирм производит этот гидролизат для продажи. Среда, предложенная Мельником
[37] для культивирования клеток почки обезьяны и состоящая из раствора Эрла, гидролизата лактальбумина и сыворотки, с успехом может быть использована для культивирования первичных культур многих тканей. Следует отметить, что различные партии гидролизата лактальбумина могут различаться по цвету, содержанию аминокислот и питательной ценности. Было отмечено
[38], что при использовании некоторых партий клетки хуже растут и даже утрачивают способность прикрепляться к стеклу. Рост клеток сильно зависит от концентрации гидролизата лактальбумина в среде [39], причем при оптимальных концентрациях отмечается резкое усиление роста. Как уже упоминалось ранее [23], на актив-
ность гидролизата лактальбумина влияет способ стерилизации. В ростовые среды часто добавляют другой продукт переваривания белка — триптозно-фосфатный бульон [40]. Его особенно полезно использовать для обогащения сред с частично определенным химическим составом.
СРЕДЫ, СОСТОЯЩИЕ ИЗ ЕСТЕСТВЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ И ХИМИЧЕСКИ ОПРЕДЕЛЕННЫХ ВЕЩЕСТВ
Хотя естественные среды лишь частично удовлетворяют требованиям, приведенным в самом начале главы, при их применении трудно достичь стандартных условий, предъявляемых современной техникой культивирования. В то же время среды полностью определенного химического состава имеют два больших недостатка. На них может расти небольшое число специально адаптированных к ним клеточных линий, и качество этих сред всегда улучшается при добавлении сыворотки. Сыворотка, следовательно, является компонентом большинства ростовых сред. Созданы среды, в состав которых входят только компоненты, существенно важные для роста клеток, однако в эти среды необходимо добавлять цельную или диализованную сыворотку. Из такого типа сред, вероятно, наиболее широко используется среда Игла [41, 42]. В ее состав входят сбалансированный солевой раствор Эрла, тринадцать аминокислот и семь витаминов, которые, как было обнаружено, необходимы для роста (табл. 1.2). Некоторые клетки растут на среде Игла с добавлением только альбумина или инозито-ла [43], хотя, как правило, ее употребляют с 5—10% сыворотки.
Для клеточных культур используют сыворотку различного происхождения. Наиболее широко применяется бычья сыворотка, однако в продажу поступает также лошадиная и кроличья сыворотки, сыворотка человека и др. Как правило, чем моложе животное, тем лучше растут клетки на такой сыворотке. Поэтому сыворотка взрослого рогатого скота хуже сыворотки теленка, лучшей же считается сыворотка эмбриона коровы. Крайне удивительно, что роль сыворотки до сих пор еще пол-
Таблица 1.2
Состав среды Игла (мг/л) (в скобках йрйведены эквиваленты для аминокислот, выраженные в мМ)
Компоненты среды Основная среда Минимальная
<1955) среда (МЕМ)
(1959)
Аминокислоты 21 (0,1) 126 (0,6)
L-аргинин, гидрохлорид 12 (0,05) 24 (0,1)
L-цистин 292 (2,0) 292 (2,0)
L-глутамин 9.5 (0,05) 38 (0,2)
L-гистидин, гидрохлорид 26 (0,2) 52 (0,4)
L-изолейцин 26 (0,2) 52 (0,4)'
L-лейции 36 (0,2) 72 (0,4)
L-лизин, гидрохлорид 7.5 (0,05) 15 (0,1)
L-метионин 18 (0,1) 32 (0,2)
L-феиилаланин 24 (0,2) 48 (0,4)
L-треонин 4 (0,02) 10 (0,05)
L-триптофан 18 (0,1) 36 (0,2)
L-тирозин 24 (0,2) 48 (0,4)
