Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фридлянской И.И. -> "Новые методы культуры животных тканей" -> 49

Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.

Фридлянской И.И., Олева Ю.В. Новые методы культуры животных тканей — М.: Мир, 1976. — 255 c.
Скачать (прямая ссылка): noviemetodikulturi1976.djvu
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 80 >> Следующая

Различные камеры, сделанные из пластика, стерилизуют у-излучением непосредственно в процессе изготовления; это камеры одноразового пользования. Другие камеры стерилизуют погружением на 30 мин в 70%-ный спирт, приготовленный путехМ разведения абсолютного спирта бидистиллированной или деионизованной водой; затем четырежды споласкивают водой такой же очистки, высушивают на воздухе в стерильных камерах и облучают 30 мин ультрафиолетом, пользуясь бактерицидной лампой Филлипса.
СОСУДЫ для КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Существуют различные типы сосудов — от обычных круглодонных стеклянных пробирок до специально сконструированных камер.
Пробирки
Для многих работ вполне пригодны обычные пробирки. Они дешевы, просты в обращении, после использования легко моются и стерилизуются.
Пробирки, желательно из боросиликатного стекла, должны быть 100 мм длиной и 12 мм в диаметре; закрывают их резиновыми пробками. При использовании пробок из силиконовой резины пробирку стерилизуют в сушильном шкафу вместе с неплотно закрытыми пробками.
В каждую пробирку помещают 1,0 мл культуральной среды, содержащей клетки в соответствующей концентрации; пробирку заполняют стерильным воздухом, со-
держащим около 5% СО21. Закрыв пробирки пробками, помещают их в специальные штативы, в которых они находятся под углом 3° к горизонтали. Верхнюю часть каждой пробирки в штативе помечают около пробки восковым карандашом. Через 2—3 ч инкубации клетки и среди них макрофаги прикрепляются к нижней поверхности пробирки и образуют монослой, так что при необходимости пробирку можно повернуть на 180°. Макрофаги исследуют с помощью обычного или фазовоконтрастного микроскопа, снабженного длиннофокусным конденсором. После исследования пробирку помещают в штатив карандашной пометкой кверху, чтобы клетки снова оказались погруженными в среду.
Не следует забывать о том, что при исследовании клеток в пробирках, стенки которых отличаются кривизной и неравномерной толщиной, качество изображения страдает. Кроме того, толщина стенки пробирок ограничивает свободное рабочее расстояние объектива микроскопа, поэтому нельзя использовать объективы с увеличением более 10 X.
Несмотря на эти недостатки, такой простой способ наблюдения весьма полезен, поскольку для многих экспериментов необходима лишь общая оценка состояния культуры, а это легко выполнимо. В тех случаях, когда требуется более детальное микроскопическое исследование или необходимо получить высококачественные микрофотографии живых клеток, лучше использовать для культивирования не пробирки, а камеры с прозрачными, тонкими, плоскими параллельными стенками (ср. качество изображения на рис. 5.1 и 5.2).
Работая с обычными пробирками, можно в качестве дополнения использовать кусочек покровного стекла такой ширины, чтобы его можно было легко вложить в пробирку и извлечь из нее. При заливке инокулиро-ванной среды в такую пробирку некоторые макрофаги оседают и прикрепляются к верхней поверхности «летающего» покровного стекла, которое можно извлечь на той или иной стадии культивирования, прикрепившиеся
1 В процессе культивирования эту процедуру следует время от времени повторять, руководствуясь цветом индикатора.
клетки зафиксировать, окрасить, заключить на предметном стекле и получить препарат для микроскопического исследования. Клетки, оставшиеся на стенке пробирки, при желании можно продолжать культивировать.
Некоторые авторы предпочитают использовать для культивирования пробирки Лейтона (рис. 5.3). Они отличаются от обычных тем, что на одной из сторон нижнего конца пробирки отштампована удлиненная плоская
площадка («окошко»). Такие пробирки бывают разных размеров и иногда с завинчивающимися крышками. Их инкубируют в горизонтальном положении окошком вниз. Клетки оседают на внутренней плоской поверхности и прикрепляются к ней. Микрофотографии клеток, растущих в таких пробирках, как правило, бывают хорошего качества. Однако эти пробирки дороже обычных и их труднее мыть.
Особенностью камеры, предназначенной для культивирования макрофагов в жидкой среде, является наличие в ней хотя бы одной плоской стенки (лучше нижней, к которой прикрепляются клетки) из прозрачного материала с таким коэффициентом преломления и толщиной, которые не искажают изображения при микроскопическом исследовании. Во всех предложенных до сих пор разновидностях камер это основное требование удовлетворялось применением в качестве одной из стенок покровного стекла. Весьма желательно, чтобы противоположная стенка была из такого же материала, располагалась параллельно той стенке, на которой растут клетки, и близко от нее (особенно, если приходится работать с обычным конденсором). Очень немногие камеры удовлетворяют всем этим требованиям, но даже в
Рис. 5.3. Пробирка Лейтона.
Камеры
тех из них, которые могут им соответствовать, по чисто техническим причинам нижняя стенка самой камеры всегда находится на некотором расстоянии от нижней поверхности корпуса, в который вмонтирована камера, и потому приходится применять специальные длиннофокусные конденсоры. Но даже при работе с таким конденсором лучше, чтобы верхняя и нижняя стенки камеры были расположены близко друг к другу; в наиболее удачных моделях расстояние между ними не превышает 1 мм.
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 80 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed