Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Независимо от источника клеток живые макрофаги в неактивном состоянии, суспендированные в жидкой гги-тательной среде, имеют форму шара (подобно моноцитам циркулирующей крови) диаметром 15—25 мкм. С помощью фазово-контрастного микроскопа можно видеть, что ядро содержит одно ядрышко, обычно овальное или почковидное, и довольно рыхлую сеть хроматина. Хроматин бывает иногда более компактным, и тогда ядро соответственно меньше и обычно более округлое. Ядро расположено в клетке эксцентрично. Если оно почковидное, то* выемка обращена в сторону дальней стенки клетки. В цитоплазме видны небольшие вакуоли, аморфные гранулы и центросома; последняя представляет собой расположенное около ядра крупное тельце, которое непрерывно совершает колебательные движения. Если ядро почковидное, то центросома лежит в участке цитоплазмы, прилежащем к выемке.
На хорошо фиксированных и окрашенных препаратах цитоплазма несколько базофильна. На них видно, что
центросома содержит две отдельные центриоли и окружена аппаратом Гольджи, около которого расположена большая часть митохондрий. Электронная микроскопия выявляет в цитоплазме многочисленные лизосомы, которые, как известно, содержат различные гидролазы — кислую фосфатазу, катепсин, дезоксирибонуклеазу, ри-бонуклеазу, различные эстеразы, а также липазу.
Макрофаги человека, кошки, мыши, кролика, крысы и других млекопитающих очень легко отличить от всех других клеток, если воспользоваться методом импрегнации серебром [12, 13]. Применение этого метода при выращивании клеток на «летающих» покровных стеклах весьма полезно для точного распознавания макрофагов в культурах, содержащих другие типы клеток (обзор соответствующей литературы и подробное описание методов можно найти в работе Маршалла [14]).
После того как живые макрофаги, суспендированные в жидкой питательной среде, прикрепляются к стеклянной поверхности сосуда, они постепенно утрачивают сферическую форму, становятся более или менее уплощенными, «выпускают» многочисленные короткие отростки, напоминая при этом блуждающие клетки в покое. Прикрепление к стеклу происходит через 2—3 ч после посева. Сила их адгезии удивительно велика (вероятно, она больше, чем у всех других клеток в аналогичных условиях). Такие культуры можно тщательно промывать, вовсе не рискуя смыть клетки. Процесс прикрепления клеток происходит особенно быстро при температуре тела и подавляется охлаждением. Если клетки прикрепляются к поверхности, несмачиваемой водой (например, большинство пластиков), то для этого требуется в 6 раз больше времени.
У прикрепившихся клеток выявляется характерная для макрофагов структура — «ундулирующая мембрана», описанная Каррелем [15]. Эта структура, которая хорошо различима в фазово-контрастном микроскопе, представляет собой узкий, совершенно прозрачный и сильно истонченный наружный край цитоплазмы^ уплощенной клетки; образуя складки наподобие волана, край этот находится в непрерывном ундулирующем движении. Когда клетка не движется, в разных участках края
вновь и вновь образуются и втягиваются многочисленные псевдоподии. Каждый из этих образующихся прозрачных выростов ограничен на конце ундулирующей мембраной. При амебоидном движении в направлении движения выбрасывается одна длинная псевдоподия, затем вся клетка вытягивается; ундулирующая мембрана окаймляет лишь передний край псевдоподии.
В однослойных культурах форма клеток варьирует в зависимости от расстояния между ними, а также от возраста культуры. В молодых культурах в отсутствие «перенаселения» и стимула к миграции клетки находятся в состоянии покоя или случайного движения. Находясь в покое, клетки вытягивают несколько псевдоподий, причем некоторые из них очень длинные и тонкие; на конце всех псевдоподий имеется ундулирующая мембрана. Иногда отдельные длинные псевдоподии могут подвергаться клазмацитозу. Если плотность клеток высока и они соприкасаются друг с другом, то, образуя многочисленные короткие отростки, клетки остаются неподвижными, хотя складчатый край псевдоподий продолжает совершать постоянные движения. В этих условиях клетки имеют тенденцию прилипать друг к другу, причем настолько крепко, что их удается снять со стенки сосуда в виде сплошного «эпителиоидного» пласта. Такое прочное соединение, вероятно, обусловлено переплетением псевдоподий соприкасающихся клеток; in vivo подобная картина характерна для макрофагов, выстилающих кровеносные синусоиды. В старых «перенаселенных» культурах некоторые эпителиоидные клетки могут сливаться друг с другом, образуя гигантские клетки.
При амебоидном движении макрофага, направленном в сторону фагоцитируемой частицы, вытягивается одна большая псевдоподия, как и при случайном движении, но, кроме того, вся мембрана выбрасывает многочисленные постоянно меняющиеся отростки. После приближения клетки частицы оказываются между двумя короткими псевдоподиями и как бы погружаются в цитоплазму клетки, находясь в вакуоле, где происходит ее переваривание. Частица, не поддающаяся перевариванию, сохраняется в клетке неопределенно долго. Если погло-
