Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фридлянской И.И. -> "Новые методы культуры животных тканей" -> 36

Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.

Фридлянской И.И., Олева Ю.В. Новые методы культуры животных тканей — М.: Мир, 1976. — 255 c.
Скачать (прямая ссылка): noviemetodikulturi1976.djvu
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 80 >> Следующая

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
Оборудование лаборатории, в которой используют методы культивирования клеток, сходно с оборудованием многих других биологических лабораторий. Необходимы термостаты, водяные бани и небольшие центрифуги. В лаборатории автора этой главы имеется теплая комната, оборудованная металлическими полками, температурный градиент в которой устанавливается с помощью вентиляторов; местоположение этих вентиляторов тщательно рассчитано. Комната с температурным градиентом очень удобна, поскольку некоторые вирусы успешно размножаются при температуре 33—35 °С, тогда как другие — при 37 °С. Для изоляции некоторых респираторных вирусов необходимо иметь аппарат для вращения культуральных сосудов. Вращение со скоростью 8—10 об/мин благоприятно сказывается на росте культуры независимо от того, инокулированы они или нет.
Все процедуры, связанные с культивированием клеток, необходимо проводить в отдельной чистой и хорошо вентилируемой комнате. В эту комнату никогда нельзя вносить вирусы. Помещение должно иметь ультрафиолетовые лампы, расположенные на расстоянии примерно 15 см от поверхности стола. Эти лампы включают каждый раз после окончания работы для стерилизации рабочего места. Если лампы установлены слишком высоко над столом, то большая часть ультрафиолетового света поглощается, не достигнув стола, и, следовательно, мы не можем быть уверены в эффективной стерилизации. Следует помнить, что ультрафиолетовый свет вызывает ожоги кожи и роговицы глаза.
Для культивирования не требуется какой-то особой стеклянной посуды. Достаточно иметь пробирки и флаконы разных размеров. Вся посуда должна быть чистой и стерильной. Для работы удобны пробирки размером 100X10 мм. Эти пробирки получают чистыми, так что их можно сразу же стерилизовать, не затрачивая время на мытье. Автор пришел к заключению, что удобнее выбрасывать пробирки после однократного пользования, чем мыть их и использовать повторно. Закрывать пробирки лучше всего силиконизированными резиновыми
пробками, которые практически не разрушаются в процессе работы. Однако они дороги, и вместо них можно использовать пробки из белой резины, срок годности которых около 6 мес.
Для хранения запасных культур используют матрасы различных типов. В том случае, когда требуется оптически чистое стекло, используют матрасы Рауса. Эти матрасы стоят дорого, поэтому их не выбрасывают, а моют и используют многократно. Существует несколько методов мытья посуды многократного пользования; некоторые из них довольно сложны. Ниже описан метод, применяемый в лаборатории автора.
Стеклянную посуду вместе с содержимым стерилизуют автоклавированием. Затем сосуды в течение ночи замачивают в разбавленном растворе детергента (Руго-neg). После этого внутреннюю поверхность сосудов энергично промывают ершиком, чтобы удалить оставшиеся клетки. Затем посуду 6 раз споласкивают водопроводной водой и, наконец, дистиллированной. Стеклянные крышки от флаконов, резиновые пробки и прокладки кипятят в растворе детергента, а затем промывают таким же способом, как и посуду. Постоянный контроль за чистотой посуды осуществляют сами культуры. Если клетки растут хорошо, значит посуду моют правильно.
Для культивирования клеток используют и пластиковую посуду, хотя она довольно дорого стоит. Пластиковые чашки Петри имеются в продаже уже несколько лет, но лишь сравнительно недавно их стали выпускать специально для целей культивирования тканей. Некоторая выпускаемая в настоящее время посуда из пластика имеет прекрасные оптические свойства. Для выращивания больших количеств клеток удобны пластиковые детские «рожкй», хотя пластик, из которого они сделаны, плохо пропускает свет.
КУЛЬТУРАЛЬНАЯ СРЕДА
Ряд фирм выпускает для культивирования тканей готовые среды вполне хорошего качества. Среды рекомендуется покупать в концентрированном виде — это и
удобнее и обходится значительно дешевле. Чаще других используют среду 199 [15] и минимальную среду Игла [16]; покупать их можно в десятикратных концентрациях. Большая часть клеточных линий растет на любой из этих сред при добавлении 5—10% сыворотки и при pH 6,8—7,2. Для создания в среде определенной величины pH используют 4,4%-ный раствор бикарбоната натрия, pH которого доводят до 7,0 двуокисью углерода.
Как добавку к среде обычно используют телячью сыворотку; часто используют эмбриональную сыворотку; ее, в частности, добавляют в поддерживающие среды. Иногда требуются небольшие количества кроличьей сыворотки.
Кроме упомянутых, выпускается ряд других сред, которые не обязательно иметь диагностическим лабораториям. К числу наиболее широко используемых антибиотиков относятся пенициллин и стрептомицин; наряду с антибиотиками применяют также антигрибковые препараты; в последнее время в ряде лабораторий вместо стрептомицина используют гентамицин (в концентрации 50 ед./мл), поскольку он более стабилен и его можно стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин. Антибиотики удобно держать в растворах определенной концентрации. При добавлении одной такой аликвоты к среде конечная концентрация должна составлять 100—200 ед./мл для пенициллина, 100—
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 80 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed