Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фридлянской И.И. -> "Новые методы культуры животных тканей" -> 24

Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.

Фридлянской И.И., Олева Ю.В. Новые методы культуры животных тканей — М.: Мир, 1976. — 255 c.
Скачать (прямая ссылка): noviemetodikulturi1976.djvu
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 80 >> Следующая

Некоторые из этих недостатков легко преодолеть, если культивировать клетки в пластиковых панелях с углублениями (микрополичашки). Для образования монослоя клеток Барский и Лепайн [1] использовали акриловые чашки. Эти клетки можно инфицировать вирусом полиомиелита и наблюдать патологические изменения в них с помощью микроскопа. На таких чашках можно проводить реакцию нейтрализации сывороточными антителами и титрование инфекционности частиц. Мельник и Ортон [2] использовали непрозрачные пластиковые пластинки с лунками для колориметрического определения антител, специфичных в отношении вируса
полиомиелита. Джонстон и Грейстон [3], а также Лен-нет и др. [4] разработали колориметрический метод определения антител, нейтрализующих аденовирус, с использованием пластиковых пластинок. Рейтсел и др. [5] провели целый ряд вирусологических опытов на пластинках из мягкого поливинилового пластика, имеющих углубления; эти авторы предложили использовать их для тестирования противовирусных препаратов. Поскольку поливиниловый пластик прозрачен, можно проводить и микроскопические наблюдения.
Преимущества пластиковых пластинок бесспорны. Они дешевле и удобнее стеклянных пробирок. Использование таких пластинок при выращивании клеток и постановке вирусологических опытов экономит не только время, но и дорогостоящие реактивы. Они занимают меньше места, и их можно выбрасывать после однократного использования; таким образом, отпадает необходимость в тщательном мытье и стерилизации.
Преимущества пластиковых пластинок для культивирования стали еще более очевидными после того, как Такачи [6] применил технику микротитрования для клеточных культур. Первоначально она была разработана для серологических тестов в вирусологии, которые осуществлялись без использования клеточных культур. Позднее Север [7] модифицировал ее для колориметрического определения вируса полиомиелита в клеточной суспензии. Розенбаум и др. [8, 9] показали, что монослои клеток различных типов можно культивировать в лунках на пластинках, изготовленных из твердых (плексиглас) или мягких (поливинил) пластмасс (Cooke Engineering Co., Alexandria, Va.).
Принцип микротехники Такачи оригинален и прост. В большинстве случаев биологические жидкости анализируют приготовлением последовательных разведений анализируемого материала (пробы) в определенном объеме растворителя. Для серологических исследований чаще всего применяют двукратные разведения, а для титрования вирусов — десятикратные. При обычном способе приготовления последовательных разведений используют стеклянные пипетки; в микросистеме пользуются «петлей», с помощью которой можно манипулиро-
вать с малыми объемами (0,025 мл) пробы. Этот объем добавляют к равному или большому объему растворителя, взятого микропипеткой. Таким образом, для получения разведения потребуется меньше времени, чем для проведения макрометода; при этом затратится и значительно меньше реактивов. Отмеченные преимущества, а также возможность получения микрокультур клеток делают эту систему чрезвычайно полезной для многих исследований, в которых применяют клеточные культуры.
В следующем разделе рассматриваются современные способы получения тканевых культур в пластинках с углублениями, их использование и возможности применения.
МИКРОТИТРОВАНИЕ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА
А. ОБОРУДОВАНИЕ
Основные принадлежности, необходимые для микротитрования, показаны на рис. 3.1. К ним относятся пластинка с лунками, микропипетка-капельница, петля, резиновая подставка и специальный бланк из фильтровальной бумаги для проверки правильности заполнения петли.
Пластинки, микропипетки и петли выпускают разные фирмы, например Cooke Engineering Co., Alexandria, Va.; Microbiological Associates, Bethesda, Md.; Linbro, New Haven, Conn. Недавно фирма Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville, Md. стала выпускать не только усовершенствованные микрополичашки, но и специальные адаптированные к ним линии различных клеток.
1. Пластинки с лунками
Их изготовляют из разных типов пластика. Пластинки, сделанные из твердого акрила (плексигласа), сравнительно дороги, но их можно использовать неоднократно. Обычно в них проводят реакцию связывания комплемента и тест на гемагглютинацию; кроме того, они пригодны для культивирования клеток. Пластинки дела*
ют также из мягкого поливинилового пластика. Такие пластинки не дороги, и их можно выбрасывать после употребления. Они пригодны для большинства методов, описанных ниже. Пластинки бывают разной величины с различным числом и расположением лунок. Дно этих лунок служит поверхностью, на которой клетки образу-
* t# pr * {IT tr «Я *
* jr ip.rf № < t
<•';* r sf w ** trn *Ci
* ifjt ?f <# if & tf *1 a J
V*# KM rtJ* * K-*tjr *r*
h<
ejfjfjf/ к kk *.»* > tjOOOtXr^HfO* #>
Рис, 3.1. Принадлежности для никротнтрозания.
/ — пластинка с лункамн для культивирования клеток; 2 — микропнпетка объемом 0,025 мл; 3 — летля для переноса материала объемом 0,025 мл; 4 — резиновая подставка для пластинки; 5 — бланк для проверки петли,
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 80 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed