Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 2.12, 142-миллиметровый держатель фильтра с 2-литровым резервуаром для фильтруемой жидкости.
ра (размером 90 или 142 мм). Такая система показана на рис. 2.11: '142-миллиметровый держатель фильтра соединен с сосудом высокого давления объемом 4 л. Для держателей фильтра размером 90 или 142 мм фирна «Миллипор» выпускает также резервуары, представляющие собой полые цилиндры из пластика или нержавеющей стали, которые находятся между верхней и нижней пластинами держателя фильтра. Такая система с резервуаром для жидкости и держателем фильтра (142 мм) показана на рис. 2.12. Этот резервуар вмещает
до 1,5 л жидкости и вполне пригодны для стерилизации нескольких литров сыворотки без использования сосуда высокого давления. К такой системе можно подсоединить набор серийных фильтров и автоклавировать систему в целом перед стерилизацией фильтрованием.
Фильтрование жидкости объемом до 100 л
При фильтровании больших количеств сыворотки (до 100 л) применяют асбестовые фильтры. Это снимает необходимость в крупнопористых мембранных фильтрах, поэтому в наборе мембранных фильтров оставляют только фильтры с диаметром пор 0,45 и 0,22 мкм. Обычно меньшие количества сыворотки фильтруют без помощи асбестовых фильтров, поскольку размер выпускаемых фильтров не позволяет использовать их для стерилизации в лабораторных условиях. Асбестовые подушки, применяемые при фильтровании сыворотки, имеют преимущества по сравнению с другими глубинными фильтрами, поскольку они сорбируют агломераты коллоидных белков, которые очень быстро засоряют мембранные GS-фильтры. Типичный фильтрующий элемент для стерилизации 25 л сыворотки содержит фильтрпресс приблизительно из пяти 14-сантиметровых асбестовых прокладок (типа S10 Carlson — Ford) для предварительной обработки и набор мембранных фильтров (НА — 0,45 мкм и GS — 0,22 мкм), которые помещены в держатель диаметром 293 мм. С помощью такой системы 30 л сыворотки стерилизуют за 2 ч при разности давления в системе 2333 мм рт. ст. Предфильтры из очищенного стекловолокна и даже диатомовой земли не столь эффективны, как из асбеста. В табл. 2.7 приведены данные, касающиеся фильтрования различных растворов, содержащих белки.
Фильтрование культуральной среды, содержащей 10% сыворотки
В этом разделе мы опишем оптимальные условия фильтрования для стерилизации культуральной среды, содержащей около 10% сыворотки. Сначала стерили-
Производительность фильтрования растворов, содержащих высокие концентрации белков
Растворы
Диаметр фильтра, мм
Фильтры
Производительность
1 Телячья сыворотка (предварительно профильтрована через асбестовые прокладки)
2. Прозрачная плазма (предварительно профильтрована через асбестовые прокладки)
3. Гамма-глобулин, 4%-ный
4. Гамма-глобулин, 25%-ный
293
142
142
293
GS (0,92 mkm)-J-+НА (0,45 мкм)
То же
GS (0,22 мкм)+ +НА (0,45 мкм) + -f-AA (0,8 мкм)-(-+SM (5,0 мкм)+ -j-предфильтр АР25
GS (0,22 mkw)-J--I- НА(0,45 мкм)+ +предфильтр из асбеста
30 л за 2 ч при 2074 мм рт. ст.
6 л за 90 мин при 1555 мм рт. ст.
10 л за 1 ч при 1037 мм рт. ст.
53 л за 2 ч при 1037 мм рт. ст.
зуют культуральную среду, используя для этой цели фильтрующий элемент, состоящий из стекловолокнистой прокладки, которую помещают на мембранный фильтр GS. Таким же способом отдельно стерилизуют сыворотку. Затем оба раствора смешивают и фильтруют через стекловолокнистую прокладку, положенную на мембранный фильтр GS. Если сыворотка до стерилизации хранилась более 48 ч, то на мембранный фильтр GS лучше помещать прокладку из чистого асбеста для удаления коллоидных агломератов белков, которые обычно образуются при Длительном хранении сыворотки. Производительность такой системы, состоящей из асбестовой прокладки диаметром 293 мм (типа SI0 Carlson — Ford)
и одного фильтра GS диаметром 293 мм, при фильтровании среды с 10% сыворотки составляет 200 л в 1 ч при разности давлений 1555 мм рт. ст.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЗМЕРА ФИЛЬТРУЮЩЕГО ЭЛЕМЕНТА
Мы не сможем выбрать наиболее эффективную систему для фильтрования жидкости, свойства которой неизвестны, если не располагаем некоторыми экспери-
Рис. 2.13. Аппарат для определения размера фильтра, необходимого для фильтрования определенного объема среды.
ментальными данными. Наиболее простой способ получения этих данных описан ниже. Берем небольшой держатель фильтра, например 25-миллиметровый микрошприц, и определяем, какие количества жидкости проходят через его фильтр при разных давлениях. Площадь для фильтрования больших объемов можно подсчитать по формуле
А . - V+
где vs — объем пробы (мл); а8 — площадь фильтрации (см2) в держателе фильтра, через который фильтруют пробу; VH----объем жидкости, стерилизуемой фильтро-
ванием; А — площадь, необходимая для стерилизации фильтрованием; 1,5 — коэффициент.
На рис. 2.13 показан 25-миллиметровый пропиленовый держатель фильтра (Swinnex-25), который используют для определения площади при фильтровании больших объемов. Площадь фильтрации в различных держателях фильтров, выпускаемых фирмой «Миллипор», приведены в табл. 2.8,
