Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Прежде чем перейти к подробному описанию систем фильтрования, которые широко используются для стерилизации сыворотки, укажем на основные принципы, которыми желательно руководствоваться при стерилизации сыворотки и белковых растворов.
1. Сыворотку или белковый раствор следует фильтровать по возможности сразу же после того, как они по-
лучены. Если сыворотку и белковые растворы хранят при низких температурах более 24 ч, то происходит выпадение коллоидных агломератов. Эти агломераты быстро забивают GS-фильтр, размер пор которого составляет 0,22 мкм, и даже фильтры с большим диаметром пор. Следовательно, наша задача существенно упростится, если мы профильтруем сыворотку до выпадения агломератов.
2. Сыворотку и белковые растворы перед фильтрованием лучше подогреть до 30—35 °С, хотя обычно их хранят охлажденными. Через один GS-фильтр можно профильтровать в четыре раза больше теплой сыворотки, чем холодной.
3. Фильтрование лучше проводить под положительным давлением, так как в этом случае фильтрат не вспенивается. Было обнаружено, что вспенивание, которое наблюдается при фильтровании сыворотки в вакууме, вызывает денатурацию белков.
4. В тех случаях, когда это возможно, сыворотку и белковые растворы лучше отцентрифугировать при максимальной скорости в течение не менее 30 мин.
Существуют Две основные системы, используемые для фильтрования сыворотки и белковых растворов. Выбор какой-либо из них всецело зависит от объема фильтруемой жидкости. Для объемов менее одного литра наиболее оптимальной является система серийного фильтрования, тогда как для объемов более одного литра наиболее экономичной является система, в которой используется предварительное фильтрование через асбестовый фильтр, а затем через комбинацию мембранных фильтров НА (0,45 мкм) и GS (0,22 мкм). В тех случаях, когда фильтруемая сыворотка используется как добавка к среде для культивирования особо «капризных» клеток, некоторые авторы считают недопустимым применение асбестовых предфильтров, поскольку, по их мнению, они влияют на рост клеток. Тогда используют систему серийного фильтрования и для объемов более одного литра. Однако в большинстве случаев такой процесс не столь экономичен, как с применением асбестовых предфильтров. Поскольку все же существуют сомнения относительно возможности использования
асбестовых предфильтров, ниже будет рассмотрена техника серийного фильтрования сыворотки для объемов более 1 л.
Коротко говоря, серийная фильтрация — это метод увеличения количества сыворотки или белкового раствора, пропускаемого через один фильтр за счет предварительной фильтрации раствора через серию мембранных фильтров с постепенно уменьшающимся диаметром пор. Фильтры с более крупными порами задерживают большую часть коллоидного материала, который быстро засоряет GS-фнльтр. Мембранные фильтры лучше разделять прокладками из дакрона, которые увеличивают полезную площадь отдельного фильтра и, следовательно, пропускную способность системы. При наличии таких прокладок фильтры не закрывают поры друг у друга, а сорбируемое загрязнение распределяется более равномерно. Прокладки, как правило, можно мыть и использовать повторно.
Фильтрование жидкости объемом менее 50 мл
Сыворотку, объем которой менее 50 мл, фильтруют через систему, состоящую из фильтрующего элемента, соединенного с выходным отверстием шприца. Фирма
Рис. 2.9. Для разлива стерильной среды в пробиоки пользуются автошпрнцвм, снабженным 25чмиллиметровым держателем с фильтром.
«Миллипор» выпускает держатели, в которые можно помещать набор мембранных фильтров диаметром 25 мм. Такие держатели имеют насадку для непосредственного соединения со шприцем Люэра. На рис. 2.9 показан держатель фильтра, соединенный с автошприцем («Миллипор»), который используется для стерилизации жидкостей.
Фильтрование жидкости объемом до 500 мл
Система фильтрования для стерилизации сыворотки и белковых растворов в объемах до 500 мл представляет собой держатель фильтра, изготовленный из нержа-
Рис. 2.10. 47-миллиметровый металлический держатель фильтра высокого давления с цнлиндром на 100 мл, который служит резервуаром для раствора.
веющего материала («Миллипор»), и находящийся под давлением (рис. 2.10). В такой держатель можно поместить набор фильтров и в собранном виде автоклавиро-вать. Держатель фильтра снабжен цилиндрическим резервуаром объемом 100 мл. Если количество фильтрующейся жидкости составляет 100—200 мл, то можно использовать этот резервуар, наполняя его один или два раза. Однако если объем фильтруемой жидкости превышает 200 мл, то резервуаром для нее служит сосуд вы-
сокого давления, из которого жидкость поступает в держатель фильтра под давлением сжатого азота из баллона. Такая система показана на рис, 2.6.
Фильтрование жидкости объемом от 500 мл до 5 л
При фильтровании объемов более 500 мл, но менее 5 л резервуаром для жидкости служит сосуд высокого давления, который соединен с держателем фильт-
Рис. 2.11. 142-миллиметровый держатель фильтра, соединенный с четырехлитровым баллоном высокого давления.
