Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
АВТОКЛАВИРОВАНИЕ
Небольшие держатели фильтров целиком заворачивают в бумагу и в таком виде автоклавируют. На большие держатели надевают шланги, конец которых заворачивают в бумагу (рис. 2.7). Аппарат для фильтрования можно автоклавировать вместе с присоединенным
Рис. 2.7. 293-миллиметровый держатель фильтра, подготовленный для автоклавировання.
к нему приемным сосудом, однако объем этого сосуда не должен превышать 2 л, а для проникновения нагретого пара сосуд должен иметь входное отверстие. Авто-клавирование проводят при 121°С; время автоклавиро-вания зависит от типа держателя. Температура в автоклаве, как известно, может не соответствовать показателям приборов, поэтому для проверки температуры при автоклавировании на держатель помещают максимальный термометр. По окончании автоклавировання, как только держатель остынет до комнатной температуры или до температуры, при которой будет осуществляться фильтрование, он готов для работы. Держатель можно быстро охладить холодной водой. Во время автоклави-рования стягивающие болты можно ослабить; стягивают их снова лишь тогда, когда аппарат остынет. После этого начинают фильтрование.
ОЧИСТКА
Окончив фильтрование, аппарат следует немедленно разобрать и вымыть. Нельзя допускать, чтобы фильтр Долго, например в течение ночи, стоял влажным. Все компоненты фильтра моют губкой в горячей воде с жидким детергентом. Поверхности, имеющие резьбу, желоб для прокладочного кольца, пазы и наконечники моют жестким ершиком, чтобы удалить все следы загрязнения. Мы уже упоминали, что для очистки ни в коем случае нельзя употреблять металлическую стружку или абразивный материал. После очистки все детали фильтровального элемента промывают горячей водопроводной водой, несколько раз споласкивают дистиллированной или деионизованной водой и хорошо высушивают, Если вытирать детали тканью или бумагой, то могут остаться волокна, которые загрязнят фильтрат.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ЖИДКОСТЕИ ФИЛЬТРОВАНИЕМ
Естественно, методы, которые применяются для фильтрования разных типов жидкостей, подробно описать невозможно. Однако указать основные принципы выбора системы фильтрования для стерилизации многих жидкостей мы можем. Ранее было сказано, что во всех системах последним фильтром должен быть фильтр GS {0,22 мкм), который гарантирует стерилизацию. Предварительная обработка, делающая весь процесс стерилизации экономичным, зависит от природы фильтруемой жидкости. Прежде чем решить, каким образом расположить фильтры и компоненты системы, свойства фильтруемой жидкости следует сравнить со свойствами жидкости, техника фильтрования которой хорошо известна. Д^ля того чтобы оценить требования, предъявляемые к фильтрованию какой-то конкретной жидкости, все жидкости делят на три группы в зависимости от необходимой предварительной обработки.
!. жидкости, КОТОРЫЕ ФИЛЬТРУЮТСЯ ЛЕГКО
К первому классу относятся легко фильтрующиеся жидкости. Это почти все прозрачные водные растворы, дистиллированная и деионизованная вода, культураль-
ные среды без сыворотки, спирты, растворы витаминов и многие другие сходные жидкости. Все эти растворы можно фильтровать непосредственно через фильтр GS, на котором лежит прокладка из чистого стеклянного волокна, служащая предфильтром. Такая прокладка (типа АР25, Millipore) значительно удлиняет сроки годности GS-фильтра. На рис. 2.8 схематически показана работа предфильтра из стеклянного волокна. Водопроводную воду можно стерилизовать прямо через GS-фильтр с предфильтром из стеклянного волокна. Однако если в ней обнаружена высокая концентрация коллоидного материала, то такую воду лучше фильтровать так, как фильтруют жидкости, требующие -предварительной обработки {см. ниже). В табл. 2.5 приведены данные, относящиеся к фильтрованию жидкостей, для которых достаточно только GS-фильтра и предфильтра из стеклянного волокна.
2. ЖИДКОСТИ, ТРЕБУЮЩИЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ
Следующий класс включает жидкости, требующие большой предварительной обработки, прежде чем их можно пропускать через GS-фильтр. Это жидкости, содержащие твердые частички или белок в достаточно высокой концентрации. К ним относятся многие масла, несинтетические бактериологические бульонные среды, антибиотики, противовирусные вакцины и среды для культивирования тканей, в которых присутствует менее 2% нефильтрованной сыворотки. Такие жидкости нуждаются в предварительной обработке: предфильтрова-нии, отстаивании и даже центрифугировании. Чаще всего применяют предфильтрование, так как центрифугирование в тех случаях, когда объем жидкости составляет
Рис. 2.8. Предфнльтр (1) из тонкого стеклянного волокна ПО’ мещают непосредсг’ венно на миллипоро-вый фильтр (2) в том же держателе.
Таблица 2.5
Производительность фильтрования жидкостей, для которых требуется минимальная предварительная обработка перед стерилизацией
Растноры Диа- Тип фильтра Производительность
метр
фйльт*
