Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 67

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 218 >> Следующая

Обнаружение веществ в элюате
В практике аналитической хроматографии обычно применяют три типа детекторов: катарометр, или детектор по теплопроводности (чувствительность около 10 мкг), аргоновый ионизационный детектор (чувствительность до 10-5 мкг) и пламенно-ионизационный детектор (чувствительность около 10-5 мкг). Работа ка-тарометра основана на том, что электрическое сопротивление проволоки зависит от температуры. Если нагретую проволоку поместить в ток газа с постоянной скоростью, проволока будет охлаждаться до температуры, определяемой газовым потоком и теплопроводностью газа. Таким образом, при постоянной скорости потока температура, а следовательно, и сопротивление являются характеристическими для данного газа. Если состав газа изменяется, происходит изменение и теплопроводности газа, а значит, и сопротивления. Эти изменения регистрируются самописцем как функция времени.
РИС. 8-14.
Пламено-ионизацнонный детектор.
/ — проволочная петля; 2 — пламя;
3 — изолятор.
элюат из колонки
При использовании аргонового ионизационного детектора газ-носитель, аргон, из колонки поступает в камеру детектора, сходную по устройству с трубкой Гейгера — Мюллера, и ионизируется под действием бомбардирующих его (3-частиц. Как уже говорилось в гл. 5, при прохождении положительно заряженных ионов аргона вблизи катода они приобретают электрон и становятся нейтральными. В результате этой рекомбинации образуется рентгеновское излучение, приводящее к ионизации многих атомов аргона. Это вызывает самопроизвольную постоянную ионизацию, в результате чего в трубке Гейгера — Мюллера получается постоянный ток. Если в потоке газа присутствует вещество с потенциалом ионизации, меньшим, чем у аргона, оно взаимодействует с ионами аргона с переносом электрона. В результате атомы вещества приобретают положительный заряд. При подходе к катоду они получают электрон и также становятся нейтральными. Однако в случае большинства органических соединений избыточная энергия рекомбинации не приводит к получению рентгеновского излучения, а вызывает разрывы химических связей. Таким образом, если присутствует такое вещество, ток между электродами уменьшается. Ток в процессе хроматографирования измеряется и регистрируется как функция времени. При этом необходимо предварительно провести калибровку, как и в случае детектора по теплопроводности. Чувствительность детектора этого типа составляет 0,1 мкг.
Время, мин
РИС. 8-15.
Газовая хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот, выделенных из печени крысы, которой вводили 25 ммоля глюкозы и 2 ммоля арахидона-та (/). Пентадеканоат (//) прибавляли перед гомогенизацией н экстракцией печени, чтобы получить стандарт для определения количеств жирных кислот в первоначальном образце; метилгептадеканоат (///) прибавляли к смеси перед введением в колонку газового хроматографа для определения вводимого количества. Использовали пламенно-ионизационный детектор. Пики соответствуют нормальным компонентам печени крысы; пик IV появляется, если в пище отсутствуют основные жирные кислоты. (Любезно предоставил Джон Левенштейн.)
Схема пламенно-ионизационного детектора показана на рис. 8-14. Водород горит в воздухе в присутствии элюата с колонки. При этом любое углеродсодержащее вещество сгорает с образованием двуокиси углерода. По не совсем ясным причинам образуются электроны и отрицательно заряженные ионы, которые регистрируются в виде тока, который затем преобразуется в разность потенциалов. Диапазон линейности детектора находится в пределах от 0,01 мкг до 5 мг, причем определяются только атомы углерода. Типичная газовая хроматограмма показана на рис. 8-15.
Идентификация компонентов по сигналам детектора
Каждый детектор регистрирует количество вещества, выходящее с колонки, как функцию времени. Однако при этом отсутствует прямое указание на вещество, которое фиксируется в виде данного пика, а также на его количество. Существует ряд методов идентификации пиков. Например, если вещество заведомо присутствует в смеси и целью хроматографии является определение его количества, пик может быть идентифицирован с помощью анализа дополнительного образца, содержащего добавочное количество известного вещества в данной смеси, после еще одного хрома-
РИС. 8-16.
Идентификация пика на газовой хроматограмме путем добавления известного вещества.
Смесь содержит фенол (/), о-крезол (2), п-крезол (3), л-крезол (4), 2,4-Диметилфенол (5) и 2,5-диметилфенол (6). Образец смеси подвергали анализу (Л), после чего к смеси добавляли л-крезол и смесь анализ'/ровали снова (Б). Отметим, что в результате пик 3 увеличился.
РИС. 8-17.
Графики, показывающие, что логарифм времени удерживания линейно зависит от числа атомов углерода для соединений гомологического ряда.
/ — пропионаты; 2 — ацетаты; 3 — нормальные спирты.
Число атомов углерода
тографирования. Если известное вещество соответствует одному из компонентов смеси, то величина пика этого компонента станет большей (рис. 8-16). Если имеются пики для ряда гомологичных веществ (например, этиловые эфиры жирных кислот), можно составить зависимость логарифма времени удерживания (т. е. времени между введением образца и выходом его из колонки) от числа атомов углерода (рис. 8-17), причем в таких случаях зависимость обычно представляет собой прямую. Добавление одного или двух стандартов из гомологичной серии позволяет провести калибровку хроматограммы. Естественно, что такой метод применим только в том случае, когда заранее известно, что все компоненты смеси являются гомологами.
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 218 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed