Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 45

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 218 >> Следующая

Список литературы
Birks ]. ВTheory and Practice of Scintillation Counting, Pergamon, 1964.
Kobayashi Y., Maudsley D. V., Practical Aspects of Liquid Scintillation Counting, in '‘Methods of Biochemical Analysis”, vol. 17, edited by D. Glick, Interscience, 1969, pp. 55—133.
Millipore Corporation, Multiple Sample Filtration and Scintillation Counting. Много полезной информации содержится в руководствах к различным сцинтилляционным счетчикам и в брошюрах, выпускаемых фирмами — изготовителями радиоактивных препаратов.
Задачи
5-1. Удельная радиоактивность метил-3Н-тимидина составляет 6 Ки/ммоль. Какая часть молекул тимидина радиоактивна? Если ДНК имеет молекулярную массу 25-106 и мечена таким тимиднном, причем 50% пар оснований составляет АТ, то сколько атомов 3Н имеется в молекуле этой ДНК? Если счетчик имеет эффективность, равную 52%, какая масса ДНК даст счет 1000 имп/мин?
5-2. Если в эксперименте с двойной меткой одинаково просто применить 3Н, 14С и 32Р, какую пару изотопов вы бы выбрали и почему?
5-3. Что лучше выбрать, 3Н-тимидин или 32Р, для эксперимента с измерением синтеза ДНК и почему?
5-4. Сцинтилляционный счетчик отрегулирован таким образом, что соотношение счета в каналах А и Б составляет 1000 для 3Н и 0,2 для 14С. При этих условиях образец дает 1450 имп/мин в канале А и 1620 имп/мин в канале Б. Каковое соотношение 3Н и 14С в образце?
5-5. В соответствии с задачей 5-4, если образец содержит 3Н-тимидин с радиоактивностью 6 Ки/ммоль и 14С-уридин с радиоактивностью 0,5 Ки/ммоль, причем эффективность счетчика равна 26% Для 3Н и 82% для 14С, определите молярное соотношение тимидина и уридина в образце. Предположим, что тимидин находится в ДНК, содержащей 43 % GC, а уридин находится в РНК, содержащей 28% уридина. Каковы массы ДНК и РНК, присутствующих в данном образце?
5-6. Поскольку 32Р вызывает разрыв тяжей в ДНК, для изучения целой ДНК целесообразно включать только один 32Р на молекулу ДНК. При этом, после того как 32Р распадется, ДНК перестает быть радиоактивной и, следовательно, не регистрируется. Если минимальная концентрация фосфата в среде роста, способная поддерживать развитие ДНК-содержащего бактериофага, составляет 10“3М, сколько чистого 32Р требуется прибавить на 1 мл раствора, чтобы получить один 32Р на фаг, считая, что ДНК имеет молекулярную массу 20* 10е?
5-7. При счете образца в течение 1 мин найдена скорость счета, равная 752 имп/мин. Сколько минут требуется считать образец, чтобы ошибка измерения составляла 1%?
5-8. В сцинтилляционном счетчике образец измеряли с помощью двух фотоумножителей, по одному с каждой стороны флакона. Флакон с образцом способен вместить 20 мл растворителя. Считаете ли вы, что скорость счета будет зависеть от объема растворителя, если известно, что образец отделен на фильтре? Что можно сказать о значении фона?
5-9. Серию стандартных гасящих образцов считали в двух каналах. Когда все образцы содержали одно и то же количество добавленной радиоактивности (1000 имп/мин), наблюдали следующие значения имп/мин:
азец Канал А Канал Б
! 502 500
2 478 425
3 445 354
4 410 290
5 379 227
6 332 170
Считается неизвестный образец. При этом в канале А регистрируется 1822 имп/мин, а в канале Б — 1211 имп/мин. Каково действительное значение радиоактивности для этого образца?
5-10. Определенный вид клеток должен расти в сложной питательной срсде, содержащей большое число компонентов. Среда никогда не анализировалась. Вы хотите ввести метку в белок с помощью 14С-ленцина, для чего прибавляете 100 мкл 14С-лейцина с удельной радиоактивностью 50 мкКи/мкг и концентрацией 25 мкг/мл к 10 мл питательной среды. После роста клеток в этой среде в течение 1 ч отбираете 0,1 мл, собираете осадок после обработки кислотой и считаете его на счетчике с эффективностью 70% по 14С. Предположим, что счетчик показал 1251 имп/мин. Известно, что образец объемом 0,1 мл содержит примерно 25 мкг белка, содержащего 4% лейцина. Сколько 14С-лейцина требуется прибавить на 1 мл среды, чтобы увеличить количество отделяемой радиоактивности приблизительно до 5000 имп/мин?
5-11. Предположим, что вы имеете счетчик Гейгера — Мюллера с эффективностью 22% по 14С и фоном 6 имп/мин, а также сцинтилляционный счетчик с эффективностью 72% по 14С и фоном 38 имп/мин. В эксперименте с !4С вы ожидаете, что ваш образец будет иметь очень малую радиоактивность— от 75 до 100 имп/мин. Какой счетчик вы предпочтете и почему?
Авторадиография
Авторадиография представляет собой метод, позволяющий локализовать радиоактивный материал в конкретной ткани, клетке, части клетки или даже в молекуле. Принцип авторадиографии состоит в том, что образец, содержащий радиоактивное вещество, вводится в прямой контакт с толстым слоем специально приготовленной фотографической эмульсии. При распаде радиоактивных атомов образца излучаемая радиация активирует отдельные зерна галогенида серебра в эмульсии, в результате чего они приобретают способность превращаться в металлическое серебро при обработке фотографическим проявителем *. Получающаяся после химического проявления картина показывает распределение радиоактивного материала в образце (рис. 6-1). Изображение рассматривают с помощью микроскопа. Получаемое изображение дает информацию о локализации радиоактивного материала в объекте или отдельных его частях и о количестве радиоактивного материала, которое можно определить по интенсивности изображения. В данной главе будет рассмотрена методическая сторона авторадиографии, принципы выбора подходящих изотопов и техники подготовки образца, трудности, возникающие в ходе работы, а также те вопросы, на которые можно получить ответы.
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 218 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed