Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 205

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 199 200 201 202 203 204 < 205 > 206 207 208 209 210 211 .. 218 >> Следующая

7-7. Обратите внимание на то, что от 107 до 2-107 клеток остается на фильтре. Поэтому при фильтровании 107, Юб или 105 клеток все они останутся на фильтре.
7-8. Следует применить радиоактивный белок или нуклеиновую кислоту. Затем полимер следует подвергнуть диализу, раствор удалить, а пленку высушить. Измерение радиоактивности пленки покажет наличие или отсутствие в ней связанного полимера.
ГЛАВА 8
8-1. Гель-проникающую хроматографию.
8-2. С помощью гель-проникающей хроматографии.
8-3. Хроматографией на гидроксиапатите.
8-4. Линейная молекула будет элюироваться первой, поскольку кольцевая молекула занимает меньший сферический домен и с большей легкостью проникает в поры агарозы. Денатурированная РНК будет элюироваться первой по тем же соображениям.
8-5. Вероятно, при высокой концентрации происходит агрегация белка. Получающаяся крупная структура не может проникнуть в поры и выходит в свободном объеме.
Увеличение диаметра равносильно увеличению числа колонок, поэтому оно будет эффективным.
8-6. Двумерная хроматография с использованием системы изопропанол — IIC1 и уксусной кислоты.
8-7. Поскольку потери составляют только 5%, а фермент X составляет 30% от общего количества, нельзя допустить предположения, что фермент X не элюируется. Поэтому можно заключить, что X теряет свою активность. Объяснении этого может быть множество. В частности, потеря активности может происходить за счет диссоциации субъединиц или денатурирования за счет связывания с заряженными группами ДЭАЭ-целлюлозы.
8-8. В одноцепочечном диапазоне, поскольку одноцепочечная ДНК связывается более прочно, чем двухцепочечная. Если концентрация фосфата достаточна для того, чтобы вызвать диссоциацию двухцепочечиого материала с
гндроксиапатита, то молекула останется связанной за счет своей одноцепочечной части.
8-9. В случае ионообменной хроматографии фермент и ионы Mg2+, вероятно, элюируются при различных ионных силах. При использовании гель-проникающей хроматографии они могут разделяться за счет различий в размерах. В результате обеих процедур фермент теряет ионы магния, что может приводить к денатурированию. Этого можно избежать в случае гель-проникающей хроматографии, если гель предварительно уравновесить с Mg2+, а элюирование проводить буфером, содержащим Mg2+.
8-10. Морфин можно связать с матрицей и на полученном сорбенте проводить аффинную хроматографию.
8-11. Следует использовать гель-проникающую хроматографию при pH 8,5. Перед анализом белка каждую фракцию необходимо выдержать при pH 5,5.
ГЛАВА 9
9-1. При высокой ионной силе раствор будет обладать достаточной проводимостью, в результате чего ток будет настолько велик, что раствор перегреется,
9-2. Пет.
9-3. Изменение pH обычно оказывает наибольшее влияние, поскольку при этом изменяется общий заряд и знак заряда. Уменьшение ионной силы увеличивает доступность заряженных групп для растворителя, хотя изменение конформации белка может приводить к обратному эффекту. Температура также влияет на конформацию, однако эти изменения часто бывают обратимыми.
9-4. Нет, поскольку два белка могут обладать одинаковой подвижностью (например, в том случае, когда они обладают очень близкими значениями отношения заряда к массе).
9-5. Похоже, что белок состоит из двух субъединиц, причем одна из них обладает в 2 раза большей молекулярной массой, чем другая. Если обработанный ДСН белок фракционировать с помощью гель-проникающей хроматографии, относительные значения молекулярной массы можно получить из соотношения между объемом элюирования и молекулярной массой. После удаления ДСН из полученных фракций субъединиц их можно хроматографировать так же, как необработанный белок, с тем, чтобы определить относительную молекулярную массу каждой субъединицы в сравнении с интактным белком. Таким способом можно выяснить, состоит ли белок из двух субъединиц по одной каждого типа, из четырех субъединиц и т. д.
9-6. Относительные расстояния миграции получаются из соотношения Ig26 000/Ig 1800—1,36. Относительные площади отражают отношение масс или (192-26 ООО)/(64-1800) =43,3.
9-7. Наиболее полезным было бы изменение размера пор геля (посредством изменения концентрации или степени сшивания), поскольку в определенных пределах размера пор можно ожидать, что два белка, имеющих одинаковую подвижность, но различные молекулярные массы, будут разделяться за счет эффекта молекулярного сита. Для того чтобы убедиться в гомогенности белков, их можно анализировать методом гель-проникающей хроматографии, поскольку два белка с различными молекулярными массами могут иметь равные молекулярные объемы. Гомогенность можно также проверить методом седиментации (гл. 11).
ГЛАВ
А 10
10-1. Так как оптическая плотность увеличивается с разбавлением, исходная концентрация должна быть между 0,00 и 0,05 мкг. Следовательно, концентрация составляет приблизительно 0,03 мкг.
10-2. Положение зоны определяется как коэффициентом диффузии каждого реагента, так и относительной концентрацией каждого из них в точке эквивалентности. Поскольку точка эквивалентности при образовании преципи-тина не обязательно одна и та же для двух белков с одинаковыми коэффициентами диффузии, в результате получается две зоны. Одна зона будет получаться только в том случае, если два белка имеют преципитиновые кривые с одинаковой точкой эквивалентности. Аналогично два белка с одинаковыми коэффициентами диффузии могут не разрешиться, если точки эквивалентности различаются, но при этом достигается равновесие.
Предыдущая << 1 .. 199 200 201 202 203 204 < 205 > 206 207 208 209 210 211 .. 218 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed