Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 170

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 164 165 166 167 168 169 < 170 > 171 172 173 174 175 176 .. 218 >> Следующая

На рис. 16-7, Л изображены спектры ДОВ и КД, которые получились бы, если бы молекула содержала два оптически активных центра, дающих очень близко один от другого два эффекта Коттона. Отметим, что на спектре КД ясно видно наличие двух элементов, в то время как кривая ДОВ довольно сложная. Еще более выразителен рис. 16-7,5, на котором приведены результаты, полученные для молекулы, имеющей значительный эффект Коттона при одной длине волны и очень слабый — на некотором расстоянии от первого. Так как спектры ДОВ полностью перекрываются, слабая полоса почти не обнаруживается, в то время как
* Здесь и далее для описания пространственной структуры молекул мы будем пользоваться термином «конформация». (В оригинале термины «конформация» и «конфигурация» необоснованно используются как синонимы.) — Прим. персе.
РИС. 16-7.
Сравнение возможностей методов ДОВ и КД для обнаружения двух оптически активных полос. В каждом случае сплошная верхняя кривая является суммой двух нижних штриховых кривых.
А — обе кривые имеют одинаковый знак и амплитуду, но различные ?-макс; В — амплитуды отличаются; В — знаки отличаются, но амплитуды почти одинаковые; Г — проводится сравнение спектра поглощения (верхняя сплошная линия), КД (штриховая линия) и ДОВ (нижняя сплошная линия) для системы, содержащей четыре полосы. Отметим, что по кривым КД можно заключить, какие полосы являются оптически активными и определить их знак.
на спектре КД, для которого характерны узкие полосы, обе полосы проявляются совершенно отчетливо. На рис. 16-7, В виден результат наложения кривых с положительным и отрицательным эффектами. Эти примеры призваны убедить читателя в том, что разрешение на спектрах КД превосходит разрешение в случае ДОВ.
Используя данные второй схемы (рис. 16-7, Г)у можно добавить к этому заключению, что анализ КД дает более ценную информацию, чем простая абсорбционная спектроскопия в неполя-ризованном свете. Отметим, что спектр поглощения просто указывает, что система состоит из четырех хромофоров (т. е. что имеются четыре полосы), в то время как из спектра КД следует, что три из четырех хромофоров (I, III и IV) связаны с оптически активными центрами. Знак КД, кроме того, свидетельствует о хи-
1 + 2
1
ДОВ
ральности хромофора. Можно также видеть, что ДОВ вследствие наложения плавных участков кривых с эффектом Коттона для полос I и III не дает четкого доказательства, является ли полоса II оптически активной.
В некоторых примерах этой главы приведены экспериментальные данные, включающие измерения ДОВ, так как несмотря на сложность спектров, многие важные результаты были получе* ны именно этим методом. Однако, читая современную научную литературу, можно видеть, что в настоящее время чаще используют метод КД.
Аппаратура для измерения ДОВ и КД
Измерения ДОВ и КД обычно проводят в растворах, хотя изредка используют пленки и твердые вещества. Раствор помещают в кювету. Основное техническое оснащение состоит из источника света с набором длин волн, системы для поляризации света, системы для измерения поляризации после того, как свет пройдет через кювету, и детектора, с помощью которого может быть измерен световой поток.
На рис. 16-8 показана упрощенная схема прибора для измерения ДОВ. Источник света и монохроматор позволяют получать излучение с определенной длиной волны. Этот свет проходит через поляризатор, который дает плоскополяризованный свет. Для определения угла поляризации используют анализатор (который фактически является просто еще одним поляризатором). Когда плоскость анализатора параллельна плоскости поляризатора, свет проходит без ослабления. Прошедший свет за-
РИС. 16-8.
Схема прибора для измерения ДОВ.
1 — источник света; 2 — поляризатор; 3 — кювета образца; 4 — анализатор; 5 — фотоумножитель; 6 — электронное оборудование; 7 — самописец.
4
7
РИС. 16-9.
Схема прибора для измерения КД.
/ — источник света; 2 — поляризатор; 3 — кристалл; 4—модулятор; 5 — свет с изменяющейся круговой поляризацией; 6 — образец; 7 — электронное оборудование.
тем падает на фотоумножитель, который превращает свет в электрический ток. Если в кювете находится образец, который вращает плоскость поляризации света, для максимального прохождения света анализатор нужно повернуть *. Угол, при котором достигается прохождение максимальной интенсивности света, определяется как наблюдаемое вращение а [см. уравнение (1)]. На практике в современных автоматических приборах одновременно меняется длина волны, определяется вращение и вычерчивается зависимость ах от X. В различных коммерческих приборах это делается несколько по-разному, но принцип такой, как описано выше.
Для измерения КД в принципе нужны два когерентных источника света, один для L- и другой для R-поляризованных по кругу лучей света, причем каждый должен быть снабжен монохроматором для выделения длин волн. Однако в коммерческих приборах (рис. 16-9) используется простой прием для получения L- и R-лучей света от одного источника. Плоскополяризованный свет проходит через кристалл, к которому приложено переменное электрическое поле. Этот кристалл (называемый электрооптиче-ским модулятором) обладает замечательным свойством: в зависимости от полярности поля он пропускает L- или R-компонент света. Так как поле — это переменный ток, луч постоянно модулируется, давая то L-, то R-свет. Этот луч затем проходит через кювету с образцом и падает на фотоумножитель. Выходной сигнал фотоумножителя преобразуется довольно сложным путем с помощью электронного оборудования, давая напряжение, пропорциональное эллиптичности, которое автоматически вычерчивается в виде функции длины волны. Так получают спектр КД-
Предыдущая << 1 .. 164 165 166 167 168 169 < 170 > 171 172 173 174 175 176 .. 218 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed