Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.
Скачать (прямая ссылка):
Последующее обсуждение показывает способ определения наклона графика.
Результаты определения скоростной седиментации с помощью фотометрической регистрации приведены на рис. 11-50. Заметим, левая диаграмма показывает индексную метку (в роторе центрифуги), находящуюся на расстоянии 5,7 см от оси вращения, и мениск; на каждой последующей диаграмме также показан мениск. Комбинированное увеличение фотографической и фотометрической систем известно, что дает возможность определять расстояние, как функцию времени. Это осуществляется путем измерения расстояния гх от мениска до границы (см. рисунок) и последующего прибавления расстояния d0 от индексной границы до мениска. Деление этой суммы на коэффициент увеличения оптических систем и прибавление к полученному результату 5,7 см дает следующие значения:
Время после достижения Расстояние от оси In г
33 000 об/мин вращения, см
2 6,225 1,8284
10 6,310 1,8421
14 6,358 1,8493
18 6,400 1,8561
22 6,445 1,8632
26 6,491 1,8705
РИС. 11-51.
График зависимости данных (см. текст), полученных при фотометрировании (рис. 11-50).
Время, мин
По этим цифрам строится график, как показано на рис. 11-51. В результате получается прямая линия, наклон которой равен 0,0521/(24-60) с"1 = 3,62-10~5. Скорость центрифуги равна 33 000 об/мин- (33 000-2я)/60 = 3,45* 103 рад/с. Следовательно, со2 составляет 1,19-107.
s = 30,1 . 10-13 с.
Так как единица Сведберга равна 10“13 с, 5 = 30,1 единицы Свед-берга. С помощью уравнения (5) это значение можно превратить
В 520, в-
Список литературы
Baldwin R. L., Boundary Spreading in Sedimentation-Velocity Experiments. 5. Measurement of the Diffusion Coefficient of Bovine Albumin by Fujita’s Equation, Biochem. J., 65, 503—512 (1957). Детали измерения s.
Brewer I. М., Pesce A. J., Ashworth R. В., Experimental Techniques in Biochemistry, Ch. 6, Prentice-Hall, 1974.
Freifelder D., Molecular Weights of Coliphages and Coliphages DNA. 4. Molecular Weights of DNA from Bacteriophages T4, T5 and T7 and the General Problem of Determination of M, J. Mol. Biol., 54, 567—577 (1970).
Freifelder О., Zonal Centrifugation, in “Enzymology”, vol. 27, edited by С. H. W. Hirs and S. N. Timasheff, Academic Press, 1973, pp. 140—150.
Hearst J. ESchmidt C. W., Density Gradient Sedimentation Equilibrium, in “Methods in Enzymology”, vol. 27, edited by С. H. W. Hirs and S. N. Timasheff, Academic Press, 1973, pp. 111—127.
Meselson М., Stahl F. MThe Replication of DNA in Escherichia coli, Proc. Nat. Acad. Sei„ 44, 671—682 (1958).
Meselson М., Stahl F. М., Vinograd /., Equilibrium Sedimentation of Macro-molecules in Density Gradients, Proc. Nat. Acad. Sci., 43, 581—588 (1957). Развитие метода равновесного центрифугирования в CsCl.
Radloff RtJ Bauer W., Vinograd Л, A Dye-Buoyant-Density Method for the Detection and Isolation of Closed Circular Duplex DNA: The Closed Circular
DNA in HeLa Cells, Proc. Nat. Acad. Sci., 57, 1514—1521 (1967). Метод с использованием бромида этидия.
Schachman Н. /С., Ultracentrifugation in Biochemistry, Academic Press, 1959.
Schumaker V., Zimm В. Я., Anomalies in Sedimentation. 3. A Model for the Inherent Instability of Solution of Very Large Particles in High Centrifugal Fields, Biopolymers, 12, 877—894 (1973). Агрегация, зависящая от скорости.
Svedberg Т., Pedersen К. О., The Ultracentrifuge, Oxford University Press, 1940.
Szybalsky Kubinski H., Hradecna Z., Summers W. C., Analytical and Preparative Separation of Complementary DNA Strands, in “Methods in Enzy-mology”, vol. 21, edited by L. Grossman and K. Moldave, Academic Press, 1971, pp. 383—413.
Szybalski W., Use of Cs2S04 for Equilibrium Density Gradient Centrifugation, in “Methods in Enzymology”, vol. 12B, edited by L. Crossman and K- Moldave, Academic Press. 1967, pp. 330—360.
Van Holde К. E., Baldwin R. L., Rapid Attainment of Sedimentation Equilibrium, J. Phys. Chem., 62, 734—743 (1958). Метод низкоскоростного равновесия.
Vinograd Bruner R., Kent RWeigle /., Band-centrifugation of Macromo-lecules and Viruses in Self-generating Density Gradients, Proc. Nat. Acad. Sci., 49, 902—910 (1963). Развитие метода зонального центрифугирования.
Yphantis D., Equilibrium Ultracentrifugation of Dilute Solutions, Biochemistry, 3, 297—317 (1964). Метод высокоскоростного равновесия.
Zimm В,, Anomalies in Sedimentation. 4. Decrease in Sedimentation Coefficients of Chains at High Fields, Biophys. Chem., 1, 279—291 (1974). Теория зависимости седиментации от скорости.
