Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 120

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 114 115 116 117 118 119 < 120 > 121 122 123 124 125 126 .. 218 >> Следующая

1,750 г
^ 1,700 -
Ю -
1,650 I—I-1-1--------1-1-1---1-
20 30 40 50 60 70 80
Содержание пар основании б*С, %
электронной микроскопии были получены первые фотографии реплицирующей ДНК.
Различие в плотности в растворах CsCl может также зависеть от содержания в ДНК пар гуанин — цитозин (G-C)
(рис. 11-42). Это свойство используется для идентификации компонентов ДНК, присутствующих в небольших количествах (ми
РИС. 11-42.
Плотность (р) ДНК в CsCl как функция содержания пар гуанин—цитозин.
График описывается уравнением р= ~(0,098)(G-C) + l,660 г/мл, где G-C — мольная доля G+C в нативной ДНК [Schild-kraut С. LMarmur Doty P., J. Mol. Biol., 4, 430—443 (1962)].
РИС. 11-43.
Фотометрическая обработка результатов равновесного центрифугирования в CsCl ДНК бактерии Е. coli (Л) и краба Cancer borealis
(В).
Для бактерий свойствен узкий интервал плотностей ДНК. ДНК краба состоит из двух дискретных фракций, причем одна из них обладает очень низкой плотностью. Эта минорная зона называется сателлитной ДНК [SueoKa N., J. Mol. Biol., 3, 31—40 (1961)].
норных). Например, ДНК краба Cancer borealis содержит 57% G-С. Однако при анализе выделенной ДНК центрифугированием в CsCl обнаружено две зоны (рис. 11-43), причем главная фракция соответствует хромосомальной ДНК (42% G-С), а другая— минорному компоненту (3% G-С). Такая минорная зона называется зоной-сателлитом, причем это часто встречается в природе. В табл. 11-2 представлены данные о различных организмах, содержащих сателлитную ДНК-
ТАБЛИЦА 11-2
Некоторые сопутствующие ДНК продукты, выявленные при центрифугировании в градиенте плотности CsCl
Плотность Плотность Относительное ко
Организм ОСНОВНОЙ по сателлитной личество продукта,
лосы полосы %
Краб (семенник)....... 1,700 1,681 30
Мышь............ 1,701 1,690 8
Пшеница (корень) ...... 1,707 1,716 Варьирует
Помидоры .......... 1,693 1,694
(хлоро
пласт)
1,705 Варьирует
1,723
Шпинат........... 1,697 1,694
(хлоро
пласт)
1,703 Варьирует
1,719
Сверчок (яичник) ...... 1,699 1,716 Неизвестно
Зародыш цыпленка...... 1,698 1,718 То же
Теленок (тимус)....... 1,699 1,713
1,719 Неизвестно
Bacillus subiilis....... 1,701 1,714 То же
Escherichia coli 15...... 1,710 1,723 Варьирует
Плотность, г/мл
В растворах CsCl одноцепочечная ДНК имеет плотность на
0,015—0,020 г/см3 большую, чем двухцепочечная. Это свойство применяется как в аналитических целях, так и для очистки этих видов ДНК.
Пример 11-С. Обнаружение начальной стадии заражения
Е. coli фагом фХ174. Фаг 0X174 содержит одноцепочечную ДНК. При заражении бактерии Е. coli <?>Х174 с радиоактивной ДНК с последующим анализом внутриклеточной ДНК центрифугированием в CsCl было обнаружено, что плотность ДНК уменьшается до уровня двухцепочечной ДНК (результат получен в лаборатории Роберта Синшеймера). Из этого был сделан вывод о том, что ДНК Х174 служит матрицей для синтеза двухцепочечной реплицирующей формы.
Плотности ДНК и белка в растворе CsCl заметно различаются и составляют примерно 1,7 и 1,3 г/см3. Таким образом, разделение зон в CsCl может использоваться для разделения этих молекул, например, для получения препаратов ДНК, не содержащих белка. Другим важным следствием этой разницы в плотности служит то, что плотность нуклеопротеинов, таких, как фаги и вирусы, может отражать соотношение белок — нуклеиновые кислоты. Например, фаг, содержащий белок и ДНК в равных количествах, имеет плотность г/г (1*3) -Н1/г( 1*7) = 1,5. На основании этого с помощью центрифугирования в CsCl Жаном Вейглем и Гретой Келленбергер были выделены мутанты бактериофага, который содержал меньшее количество ДНК за счет делеции. Так как содержание белка не уменьшается пропорционально уменьшению содержания ДНК, фаг, полученный в результате делеции, имеет меньшую плотность, чем исходный фаг. Скотт Эммонс выделил также частицы фага с избыточным содержанием ДНК, используя их более высокую плотность. Это свойство используется не только для выделения желаемых мутантов, но и для различения фагов в физических экспериментах, т. е. содержание ДНК играет роль плотностной метки. Это использовано в следующем примере.
Предыдущая << 1 .. 114 115 116 117 118 119 < 120 > 121 122 123 124 125 126 .. 218 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed