Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Фрайфелдер Д. -> "Физическая биохимия " -> 101

Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.

Фрайфелдер Д. Физическая биохимия — М.: Мир, 1980. — 580 c.
Скачать (прямая ссылка): fizicheskayabiohimiya1980.djvu
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 218 >> Следующая

— ю
22
торый обладает достоинствами обоих упомянутых выше материалов, однако при этом возможна работа только при относительно низких скоростях вследствие высокой плотности этого металла.
Для решения некоторых задач используют двухсекторную ячейку, один из секторов которой содержит раствор, а другой — растворитель, что позволяет получить базовую линию для оптической системы.
Распределение концентрации определяется путем пропускания через движущуюся ячейку света и регистрации интенсивности проходящего света либо на фотопленке, либо с помощью электронного сканирующего устройства. Электронное сканирующее
4
5
6
РИС. 11-4.
Препаративная ультрацентрифуга фирмы Beckman.
/ — бронированная камера; 2 — ротор; 3 — мотор; 4 — контрольная панель; 5 — отодвигающийся люк; 5 — охлаждение; 7 — вакуумный насос.
РИС 11-5.
Ротор с подвесными стаканами (слева) и угловой ротор (справа) центрифуги фирмы Beckman. Эти роторы позволяют достигать ускорений 420 ООО и 368 ООО g соответствено при максимальной скорости 65 ООО об/мин.
устройство хотя и стоит очень дорого, но позволяет получить точность, недостижимую при использовании фотографической системы.
На рис. 11-4 приведена схема препаративной ультрацентрифуги фирмы Beckman. Этот прибор более прост, чем аналитический.
РИС. 11-6.
Капельное фракционирование содержимого центрифужной пробирки.
Дно пробирки прокалывают иглой. При условии отсутствия конвекции (т. е. при центрифугировании в градиенте плотности) капли соответствуют индивидуальным слоям жидкости. Схематически эти слои показаны в виде черных и светлых полос.
©
4
*
и У и и и У У
На рис. 11-5 показаны два типа роторов для препаративной ультрацентрифуги. Угловой ротор в первую очередь предназначен для осаждения материалов *. Он очень эффективен для этой цели, так как вещество проходит до стенки центрифужной пробирки короткое расстояние; накапливающийся на стенке материал быстро сползает по стенке на дно пробирки. Ротор с подвесными стаканами большей частью используют для аналитического равновесного и зонального центрифугирования (будет описано вкратце).
Если центрифугирование проводится для получения осадка, то после остановки вращения ротора пробирку вынимают и жидкий супернатант сливают с осадка. Если центрифугирование проводится в аналитических целях, то для фракционирования содержимого пробирки в дне пробирки прокалывают отверстие и собирают раствор по каплям. Если скорость течения при этом достаточно мала, чтобы не возникла турбулентность, каждая капля будет представлять собой единичный слой жидкости в пробирке, как показано на рис. 11-6.
Следует отметить, что стенки пробирок в препаративных роторах параллельны в отличие от ячейки секториальной формы, показанной на рис. 11-3. Это вызывает конвекцию и будет обсуждаться ниже в разделе, посвященном зональному центрифугированию. Однако до сих пор еще не разработан удовлетворительный препаративный ротор с пробирками секториальной формы.
* Здесь под осаждением понимается образование плотного осадка на дме центрифужной пробирки.
Распределение концентрации в эксперименте по скоростной седиментации в секторной ячейке
В седиментационных экспериментах существует два типа начальных условий. В одном частицы равномерно распределены в растворе. При седиментации частицы движутся через раствор, оставляя за собой зону чистого растворителя. Это носит название скоростной седиментации, в этом случае вся информация получается из параметров границы между растворителем и раствором. Другой тип, зональная седиментация, отличается тем, что образец наносится в виде слоя поверх более плотного растворителя. В этом разделе будет обсуждаться только скоростная седиментация.
На рис. 11-7 показано распределение концентрации в секторной ячейке центрифуги в случае различных растворов макромолекул после периода центрифугирования, достаточного для того, чтобы материал прошел приблизительно половину пути до дна ячейки *. Ячейка в серии А содержит материал с одним коэффициентом седиментации (в таких случаях обычно используют выражение «гомогенный по коэффициенту седиментации» или термин «монодисперсный»). Кроме того, он имеет низкий коэффициент диффузии, что приводит к четкой границе. В серии Б ячейка содержит смесь равных количеств двух компонентов, каждый из которых имеет собственный коэффициент седиментации и четкую границу, как в серии А. В серии В ячейка заполнена смесью компонентов, коэффициенты седиментации которых мало отличаются один от другого. Второй ряд представляет собой графики зависимости концентрации седиментирующих веществ в каждой ячейке от ее длины. Область изменения концентрации называется границей, верхняя ровная часть носит название плато. В третьем ряду приведены графики производных концентрационных кривых, т. е. градиенты концентрации.
Следует отметить, что 1) гомогенное вещество дает очень четкую границу, 2) смесь двух компонентов дает две четкие границы, похожие на ступени, 3) многокомпонентная смесь приводит к получению многоступенчатой границы, сливающейся в широкую плавную кривую, и 4) в каждом случае частицы осаждаются на дно ячейки.
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 218 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed