Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка):
анализ липидов, то используют несколько систем растворителей.
Разделение и анализ липидных компонентов мембран
161
Наиболее важными для разделения липидов характеристиками системы
растворителей являются результирующая полярность смеси и ее
кислотность/основность. Ниже мы рассмотрим несколько систем,
предназначенных для специальных целей (см. рис. 4.5 и табл. 4.1).
Приведенные примеры в основном охватывают тот круг проблем, которые
возникают при исследовании мембранных липидов, и иллюстрируют возможности
метода. Однако этот список является выборочным и в литературе сообщается
о многих других системах. Заинтересованный читатель может обратиться к
работе [7], а также к работам, упомянутым в руководствах [5, 6].
фг
с'
Рис. 4.4. Двумерная ТСХ. А. Разделяемые липиды наносят в виде пятна в
правом нижнем углу тастинки. В левой части пластинки осторожно отмечают
карандашом дорожку для стандартного образца С. Б. Положение липидов после
хроматографии в первом направлении. В. Пластинку поворачивают на 90°, так
что ее правый край оказывается внизу. Отмечают вторую дорожку и наносят
тот же стандарт С'. Г. При разделении во второй системе растворителей
липиды поднимаются вверх по пластинке. Положение стандарта отмечено на
пересечении пунктирных линий. Штриховые линии и Ф2 указывают положение
фронта растворителя в системах 1 и 2 соответственно. 0 - исходное
положение нанесенного образца.
11-1488
162
Глава 4
Л Б в
сь О ф NL -err ф MG
C3
тс О
РЕ CD CL О
PI CD PA О
о PS CD Cer о
FA PC CD PC PE о о
ПС СЗ
с о
МС PL S-0 SPH LPL So -с-о
Г Д Е
Ф
С1 О <D PE О
GD СЗ РЕ PC о
GZ О РМЕ <d PI о
а О РПЕ CD о
CD CD PI-P
ст о PC SPH PI-PP о
C5 о о с:::-o 0-0
Z
ж --
Разделение и анализ липидных компонентов мембран
163
3.2.1. Разделение неполярных липидов
Неполярные липиды разделяют в тонком слое силикагеля, используя систему
растворителей, состоящую из гептана (или легкого петролейного эфира 40-
60), диэтилового эфира и ледяной уксусной кислоты (60 : 40 : 2, о/о).
Фосфолипиды остаются на старте, а другие липиды распределяются так, как
показано на рис. 4.5, Л.
3.2.2. Разделение основных классов фосфолипидов
Фосфолипиды разделяют в тонком слое силикагеля, используя систему
растворителей хлороформ/метанол/ледяная уксусная кнслота/вода (60:50:1:4,
о/о). Эту систему молено использовать для разделения
фосфатидилэтаноламика, фосфати-дилсерина, фосфатидилинозитола,
фосфатидилхолина и сфин-гомиелина (рис. 4.5, Б). Лизофосфолиппды остаются
вблизи старта и не полностью отделяются друг от друга. Кардиолипин
(митохондриальный фосфолипид) и другие кислые фосфолипиды мигрируют
быстрее фосфатидилэтаноламина. Неполярные липиды перемещаются с фронтом
растворителя. Если они мешают исследованию, то их можно переместить к
самому краю пластинки. Для этого после высушивания следует провести
повторное элюирование эфиром в том же направлении до уровня на 2-3 см
выше фронта первого растворителя.
3.2.3. Разделение кислых фосфолипидов
Системы для разделения кислых фосфолипидов с двукратным элюированием в
одном направлении описаны в работе [8]. После нанесения липидов проводят
разделение в смеси аце-
Рис. 4.5. Системы для разделения липидов методом ТСХ на силикагеле Н. А.
Гептан/диэтнловый эфнр/ледяная уксусная кислота, 60 : 40 : 2. Б.
Хлороформ/метанол/ледяная уксусная кислота/вода, 60 : 50 : 1 : 4. В.
Ацетон/легкий петролейный эфир. 1:3, до положения фронта Фь затем
хлороформ/метанол/ледяная уксусная кнслота/вода, 80 : 13:8: 0,3, до
положения фронта Ф2. Г. Пропанол/вода, 7:3. Д. н-Пропанол/пропионовая
кислота/хлороформ/вода, 3:2:2: 1. Е. Метанол/хлороформ/аммиак/вода, 48 :
40 : 5 : 10. Ж. Разделение фосфолипидов и лизофосфолппидов при двумерной
ТСХ. Система 1, хлороформ/метанол/аммиак, 65 : 35 : 5, до фронта Фь
Система 2, хлороформ/ме-танот/ледяная уксусная кислота/вода, 10 : 2 : 4 :
2 : 1. TG - триацплглицеролы; DG - дпацилглнцеролы; MG -
моноацилглнцеролы; С - холестерол; СЕ - эфиры холестерола; FA - жирные
кислоты; PL - фосфолипиды; NL - нейтральные липиды; РЕ -
фосфатидилэтаноламин; PI - фосфатидилинозитол; PS - фосфатидилсерин; PC -
фосфатнди лхолин; SPH - сфингомиелин; LPL - лизофосфатидилхолин; PG -
фосфатидилглицерол; Сег - церамидмоногексозы; РА - фосфатидная кислота;
CLP - кардиолипин; РМЕ - фосфатидилмономе-тилэтанотамин; PDE -
фосфатиднлднметилэтаноламин; PI-P - фосфатидили-нозитолмонофосфат; PI-PP
- фосфатиднлинозитолдифосфат; GO-G5 - ган-глиознды; LPC -
лизофосфатидилхолин; LPE - лнзофосфатидилэтаноламин;
LPS - лизофосфатидилсерин; LPI - лизофосфатндилинозитол.
11*
164
Глава 4
Таблица 4.1. Системы растворителей, используемые для разделения
мембранных липидов
Разделение нейтральных липидов
Гепган/диэтнловый эфир/ледяная уксусная кислота, 60 : 40 : 1
Гептан/диэтнловый эфнр/ледяная уксусная кислота, 80 : 20 : 1
Разделение фосфолипидов
