Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Финдлея Дж.Б. -> "Биологические мембраны" -> 48

Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.

Финдлея Дж.Б., Эванза У.Г. Биологические мембраны — М.: Мир, 1990. — 424 c.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 191 >> Следующая

Physiol., 56, 850.
197. Vigil E. L. (1973). Sub Cell Biochem., 2, 237.
198. Tolbert N. E. (1980). In: The Biochemistry of Plants. Stumpf P. K.,
Conn E. E. (eds.), Academic Press, New York, p. 359.
199. Mettler I. J.. Beevers H. (1980). Plant Physiol., 66, 555.
200. Huang A. H. C., Trelease R. N.. Moore T. S. Jr. (1983). Plant
Peroxisomes. Academic Press, New York.
201. Baker A. L" Tolbert N. E. (1966). Methods Enzymol., 9, 338.
202. Tolbert N. E" Oeser A., Kisaki Т., Hageman R. LI., Yamazaki R. K.
(1968). J. Biol. Chem., 243, 5179.
203. Cooper T. G" Beevers H. (1969). J. Biol. Chem., 244, 3507.
204. Cooper T. G., Beevers H. (1969). J. Biol. Chem., 244, 3514.
205. Newcomb E. H. (1980). In: Coated Vesicles. Ockleford C. D., Whyte A.
(eds.), Cambridge University Press, Cambridge, p. 55.
206. Tanchak M. A., Griming L. R., Mersey B. G., Fowke L. C. (1984).
Planta,
162, 481.
207. Joachim S., Robinson D. G. (1984). Eur. J. Cell Biol., 34, 212.
208. Mersey B. G., Griffing L. R., Rennie P. J., Fowke L. C. (1985).
Planta,
163, 317.
209. Griffing L. R" Mersey B. G., Fowke L. C. (1986). Planta, 167, 175.
ГЛАВА 3
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕМБРАН
Элейн М. Бейлез, Питер Дж. Ричардсон, Дж. Пол Лузио
1. Введение
Иммунологические методы широко используются для исследования структуры и
функций мембран. Развитию этих методов способствовала возможность
получения специфических антител к мембранным антигенам даже в тех
случаях, когда эти антигены не удавалось получить в чистом виде или
охарактеризовать. В настоящее время иммунологические методы широко
используются для идентификации мембранных компонентов, их локализации,
оценки количества, топографического анализа и выделения. Антитела
применяются для выделения фракций мембран, для воздействия на те или иные
биологические функции компонентов мембран, а также в качестве
специфических проб при молекулярном клонировании кДНК, кодирующей
мембранные белки. Мы не стремились описать все известные методики
выявления антигенов клеточной поверхности или привести полную информацию
о разнообразных методах и подходах, позволяющих визуализировать комплексы
антиген - антитело с помощью световой и электронной микроскопии. Наша
задача состояла в том, чтобы обсудить достоинства и недостатки
поликлональных или моноклональных антител к различным компонентам
мембран, а также указать на практические моменты получения и
использования этих антител для иммуноблоттинга, выделения мембранных
фракций или связанных с мембранами макромолекул, а также в качестве проб
для молекулярного клонирования.
2. Получение поликлональных и моноклональных антител к компонентам
мембран
2.1. Достоинства и недостатки поликлональных и моноклональных антител
Антитела широко используются в качестве инструмента во многих
биологических исследованиях, и тем не менее зачастую бывает трудно или
даже невозможно предопределить их свойст-
110
Глава 3
ва. Обычные поликлональные антисыворотки содержат антитела с разной
специфичностью и сродством, а также антитела разных классов и типов.
Кроме того, если использованный антиген содержит примеси, то
поликлональные антисыворотки будут скорее всего включать антитела ко всем
компонентам иммуногена. Даже при самых благоприятных условиях
специфические антитела вряд ли будут составлять более 5% от общего
количества иммуноглобулинов сыворотки; правда, при наличии очищенного
антигена можно получить специфические антитела с помощью аффинной
хроматографии.
Моноклональные антитела удается получить в виде чистого химического
реагента, даже если имеющийся в наличии антиген не свободен от примесей.
Как мы увидим, моноклональные антитела чрезвычайно полезны при
иммуноаффиннон очистке многих минорных мембранных белков. Большинство
получаемых моноклональных антител имеют низкую аффинность (Ка< <0,5 нМ-1
[1]. Низкоаффинные антитела могут применяться для самых разных целей (в
частности, для получения очищенных компонентов иммуноаффинными методами);
высокоаффинные же моноклональные антитела или поликлональные антитела с
высокой авидностью, очищенные методом аффинной хроматографии, по-
видимому, наиболее целесообразно использовать для иммуноаффинной очистки
фракций мембран, иммуноблоттинга, а также в качестве проб при
молекулярном клонировании. В некоторых случаях поликлональные антитела
оказываются предпочтительными, поскольку они узнают более чем один
антигенный участок (эпитоп) на интересующей исследователя макромолекуле.
Моноклональные же антитела по определению узнают только один тип
эпитопов, хотя конкретный эпитоп может встречаться более одного раза в
составе антигена; примером такого рода служит димер мембранного фермента
5-нуклео-тидазы [2].
Участки белковых молекул, определяющие их иммуноген-ность, стали в
последние годы предметом всестороннего изучения. Особый интерес
представляют работы Атасси и др. [3]. Эти и другие исследователи
показали, что поликлональные сыворотки к природным белкам содержат
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 191 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed