Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Финдлея Дж.Б. -> "Биологические мембраны" -> 154

Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.

Финдлея Дж.Б., Эванза У.Г. Биологические мембраны — М.: Мир, 1990. — 424 c.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 191 >> Следующая

Biomembranes. Papageorgiou G. C., Barber J., Papa S. (eds.), Plenum
Press, New York, p. 201.
51. Schulditier S., Rottenberg H., Avron M. (1972). Eur. J. Biochem., 25,
64.
52. Kogure K., Alonso O. F., Martinez E. (1980). Brain Res., 195, 95.
53. LaManna J. C" McCracken K. A. (1984). Anal. Biochem., 142, 117.
54. Ashley С. C., Campbell A. K. (1979). Detection and Measurement of
Free Ca2+ in Cells. Elsevier/North Holland, Amsterdam.
55. Scarpa A. (1972). Methods Enzymol., 24, 322.
56. Azzi A., Chance B" Radda G. K., Lee C. P. (1969). Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 62, 612.
57. Brocklehurst J. R., Freedman R. B., Ftancock D. J., Radda G. K.
(1970). Biochem. J., 116, 721.
58. Bashford C. L" Radda G. K., Ritchie G. A. (1975). FEBS Lett., 50, 21.
59. Bashford C. L., Casey R. P., Radda G. K., Ritchie G. A. (1976).
Neuroscience, 1 399.
60. Flanagan М. Т., Hesketh T. R. (1973). Biochim. Biophys. Acta, 298,
535.
61. Shinitzky M" Barenholz Y. (1974). J. Biol. Chem., 249, 2652.
62. Shinitzky М., Inbar M. (1974). J. Mol. Biol., 85, 603.
63. Bashford C. L., Harrison S. J., Radda G. K-, Mehdi Q.
(1975). Biochem. J.,
146, 473.
64. Bashford C. L" Morgan C. G., Radda G. K. (1976). Biochim. Biophys.
Acta, 426, 157.
65. Thulborn K. R., Sawyer W. H. (1978). Biochim. Biophys. Acta, 511,
125.
66. Bashford C. L., Foster K. A., Micklem K. Pasternak C. A. (1981).
Biochem. Soc. Trans., 9, 80.
67. Kerr S. E. (1935). J. Biol. Chem., 110, 625.
68. Dutton P. L" Petty К. M" Bonner H. S., Morse S. D. (1975).
Biochim. Bio-
phys. Acta, 387, 536.
69. Chance B" Graham N. (1971). Rev. Sci. Instrum., 42, 941.
ГЛАВА 8
БИОФИЗИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН
Дитер Шуберт
1. Введение
Биофизические методы внесли и безусловно будут вносить и впредь
значительный вклад в изучение биомембран. Теоретические основы
большинства биофизических методов и использующиеся при этом приборы и
способы обработки данных весьма сложны, поэтому мы не можем в рамках
данной книги подробно рассмотреть обычно применяющиеся подходы.
Большинство экспериментов с использованием биофизических методов может
проводиться только специалистами, и в данной главе мы уделим основное
внимание не деталям подобных экспериментов, а их возможностям и
ограничениям. При этом предпочтение будет отдано методам, непосредственно
применимым к изучению мембранных белков (в отличие от тех, для которых,
например, необходимо присутствие специфических внутренних хромофоров; см.
гл. 7). Эта глава предназначена не для специалистов в области биофизики,
а для тех, кто слабо представляет, какого рода информацию можно получить
с помощью того или иного метода.
2. Размеры, форма и конформация мембранных белков и их комплексов
Большинство описанных в этом разделе методов нельзя применять к изучению
мембранных белков в их естественном окружении- в составе мембран,
требуется их солюбилизация, а нередко и очистка. Ясно, что значимую
структурную информацию можно получить только при условии, что в
результате солюбилизации и очистки конформация белка существенно не
изменяется. К счастью, для периферических мембранных белков это не столь
большая проблема, иное дело - интегральные белки. В этом случае,
вероятно, для выделения лучше всего использовать подходящие неионные
детергенты, поскольку в таких растворах и укладка полипептидной цепи, и
белок-белковые взаимодействия, по-видимому, остаются такими же, как и в
натнз-
340
Глава 8
ных мембранах (гл. 5). С помощью этого подхода и применения биофизических
методов можно получить столь же значимые результаты, что и в случае
растворимых белков [1].
2.1. Молекулярная масса мономерных белков или субъединиц
Сейчас молекулярную массу полипептидов определяют почти исключительно с
помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. В отличие от классических методов,
таких, как аналитическое ультрацентрифугирование, рассеяние света,
малоугловое рентгеновское рассеяние или осмометрия, гель-электрофорез не
требует столь дорогостоящего оборудования или изощренных процедур
обработки полученных данных. Не нужны также большие количества
высокоочищенного белка: можно определить даже молекулярную массу белков -
минорных компонентов пробы. Более того, ДСН - это наиболее эффективный
реагент для солюбилизации мембранных белков и деполимеризации белковых
комплексов. Подробно эти методы описаны в другой книге данной серии [2]
(см. также гл. 6).
Гель-электрофорез в ПААГ с ДСН безусловно является наиболее полезным
методом определения молекулярных масс, однако необходимо отметить, что он
не только не имеет какого-либо теоретического обоснования, но и в
некоторых случаях вообще неприменим [1]. В частности, определение
молекулярных масс гликопротеинов с высоким содержанием углеводов обычно
приводит к неверным результатам. Нужно также иметь в виду, что в
присутствии ДСН не всегда образуются только мономерные белковые
субъединицы ([1]; см. гл. 6). В случае гликопротеинов неплохие результаты
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 191 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed