Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка):
Максимальная специфичность наблюдается при pH 8,5; можно использовать
любой подходящий буфер с концентрацией не более 10 мМ, 30-60 мин, 4-30
°С. Наиболее активны иодпроизводные [86]
л-Хлормеркурибензоат или беизолсу ьфокислота Связываются
нековалептно и обратимо, медлен но проникают. Буфер (pH 7 0) с концентра
цией не более 1 мМ, 20-30 °С, до 3 ч [871
Дансил- и дабсил-хлориды Флуоресцируют; применяются в виде
дисперсии в липидных везикулах; 0,1 М фосфат, 0,15 М сахароза, pH 9,0,
4°С, до 3 ч [88]
N-этил- и фенилма- леимиды Буфер (pH 7,0-8,0) с
концентрацией не более 1 мМ, 20-37 °С, до 1 ч. Могут реагировать с His и
Lys в экстремальных условиях [89]
3,5-Дииод-4-диазо-беп-золсульфокислот а См. разд. 6.1.1 [90]
NAP-таурин (см. также табл. 6.5) Не проникает при 0°С Буфер (pH
7,0-8,0) с концентрацией не более 1 мМ. 0-20 °С, до 30 мин [91, 92]
Глутаминовая кислота Карбоднимнды Некоторые водорастворимые формы
pH 4,5-7,0, 20-30 °С, до 1 ч [93, 94]
Глутамин Трансглутамияаза Катализирует включение меченых
аминосодержащих соединений, например [14С]-путресцина. pH 7,4, 25-37 °С,
до 18 ч [95]
Гистидин
Лизни
(О
СЮ
СО
Дансил- и дабсил-
хлориды
Иод
Метил- иэтилацет-имидаты
Ангидриды уксусной и янтарной кислот
Дансил- и дабсил-хлориды
1-фтор-2,4-динит-
робензол (реагент Сэнгера)
Днметнламииоазо-бензол- и фенил-изотпоцнанаты
3,5-Д|Ш()д-4-дпа зобепзол-сульфокпслита
Холин- и изетионилацет-имидаты
3-Азидо-2,7-нафталинди-сульфонат (см. табл. 6.5)
3,5-Дииод-4-диазобензол-
сульфокислота
N-Формилметионилсуль-фонметилфосф ат (f35S] -FMPP)
N-Г идрокснсу кцинимил-биотин и иминобнотин, сульфосукцинимилбиотнн
4-Ацетамидо-4/-изотиоци' ан- и 4,4'-диизотиоцнан 2,2'-стильбенднсульфона-
ты (SITS и DIDS)
Как для цистеина
См. разд. 6.1.1 Как для цистеина
pH 8,0, 1-10 мМ, 20-30 °С, до 2 ч
Практически не проникают из-за высокой реакционной способности. pH 7,0-
7,5, добавляют порциями до! мМ, 4-25 °С, 10-60 мин
pH 6,0-8,0, до 1 мМ, 4-37 °С, до 1 ч См. разд. 6.1.1.
Как для цистеина, более легко метятся аминогруппы
pH 8,0-9,0, до 10 мМ, 20-30 °С, 1-3 ч. Реагирует также с остатками
цистеина и тирозина
pH 9,5-10,0, 50 мкМ, 20-30 °С, 10-30 мнн
Вводит свободный биотиновый остаток, что облегчает очистку на
авидинсодержащих аффинных носителях. Можно вводить спейсерпую группу и
расщепляемые связи; pH 8,0, 1 мМ, 4 °С, 2 ч
pH 7,0-8,0, до 1 мМ; 4-30 °С, до 1 ч. Проявляют специфичность по
отношению к анион-транспортирующему белку эритроцитов
[96, 97] [90, 98]
[99]
[90]
[100]
[1011
[102]
Pierce
103, 104]
Продолжение
Аминокис-
лота
Проникающие
реагенты
Непроникающне
реагенты
Реакции/условия/пояснения
Ссылки
Тирозин
(-ОН)
N-Сукшшимидил-пропиоиат и его 3-(4-гидрокснфе-нпл)-, 3-(4-гндрок-си-5-
иодфенил)- и 3-(4-гндроксн-3,5-дииодфенил) -производные (реагент Болтона
и Хантера)
Уксусный ангид' рид
Дансил- и дабснл-хлориды
Свободный под
Пиридоксальфосфат вместе с NaB[3H]<
N-Г идроксисукцнними-днльный эфир трет-бу-TOKCH-L- f35S] -метионина
(I*S]LR)
Сульфосукцинимидил-3 (4-гидроксифенпл) -пропионат (водорастворимым
реагент Болтона н Хантера)
Сульфосукцинимидилаце-
тат
2,4,6-Трииитробензол-
сульфокислота
3,5-Дииод-4-диазобен-золсульфокнслота
Иодирование с помощью иодогена, иодобидса, лак топероксидазы
л-Нитробензолсульфо-нилхлорид________________
pH 7,5, до 1 мМ, 4-25 "С, до 30 мин pH 6-9 (гидролизуется при щелочных
pH)
мкМ. (10-100-кратный избыток по отношению к NHi-группам), 0-30°С, 10-30
мин (см. табл. 6.7). Широко используется для 1251-подирова-ния белков
(см. разд. 6.1.1)
Используют так же, как в случае сукцпнимн.ть-ных эфиров (табп. 6.7)
pH 8,0-9,0, до 1 мМ, 20-40°С, до 24 ч Как в случае лизина
Как в случае лизина См. разд. 0,1.1
pH 7,0- 8,0, 1 мМ, 25 °С, 30 мин
[1051
Amer-
sham
Г1061 [1071
Pierce
[1081
Выделение и модификация мембранных белков
285
Таблица 6.5. Универсальные фоточувствительные модифицирующие реагенты
Проникающие
Непроникающие
Адмантандиазирин 1 -Азидо-4-иодбензол 1 -Азидо-5-иоднафталин 5-Азидо- 1-
нафталин
12-(4-Азидо-2-нитрофе-ноксн) стеароилглюкоза-мин
N- (4-Азидо-2-нитрофе-нил) -2-амииоэтнлсульфо-нат (NAP-таурин)
5- (4-Азндо-2-нитрофе-ннл) Г36Б] тиофенол
Диазофлуорен
Гексаноилдииод-N - (4-азидо-2-нитрофенил) -ти-рамин
Пиреи- 1-сульфурилазид
3-Трифторметил-3-(л-
иодфеиил)диазирин
3-Азидо-(2,7)-нафталип-дисульфонат
Диазотрифториды (имеются также проникающие аналоги)
3,5-Дииод-4-азндобензол-сульфокислота
337-372 им [115]
260 нм [119-1221 310 нм [1221
319, 382 нм, 0.1-1 мМ. pH 7-8, 4-30 °С [991
1-2 М, обладает слабым детергентным действием Г1231
Проницаемость мембран можно значительно снизить при 0-4°С, 0,1- 1 мМ,
может проявлять детергентоподобные свойства [91, 921
395 нм [129]
[124, 1251
[126]
460 нм [129]
355 нм [130]
Дназоизомер является инертным, 353 нм [127, 1281
II. 1,3,4,6-ТетрахАор-3,6-дифенилгликурил. (Более ранние ссылки см. в
[111].) Этот реагент (иодоген; Pierce) эффективно катализирует
