Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
Сайт-специфический мутагенез
Традиционно генетики были вынуждены работать с мутациями, расположение которых в геноме они не могли контролировать. Поэтому сайт-специфический мутагенез — один из приемов генной инженерии — представляет для них особый интерес. Описано множество методов сайт-специфического мутагенеза [16, 117, 135, 138]. Эти методы основаны на способности рестрикционных эндонуклеаз расщеплять ДНК по определенным последо-
зательностям. Эндонуклеазу .подбирают таким образом, чтобы >на расщепляла ДНК. в том сайте (или рядом с тем сайтом), в сотором требуется получить мутацию, причем ДНК обрабатывают в условиях, когда происходит разрыв лишь в одной цепи молекулы. Чтобы получить небольшой пробел в месте разрыва, аспользуют экзонуклеазу, а затем ДНК либо обрабатывают мутагеном, специфичным к одноцепочечной ДНК, и заполняют про-Зел с помощью полимеразы, либо просто репарируют ДНК. в условиях, когда в восстанавливаемую последовательность вносятся ошибки. Эту мутагенную методику использовали для исследования роли определенных нуклеотидов вблизи точки начала репликации ДНК SV40 {136, 137]. Она обещает быть полезной и 1в других вирусных системах.
Итоги и перспективы
Изложенный краткий обзор генетики вирусов животных был вынужденно выборочным и по рассмотренным темам, и по приведенным примерам. Закономерно, что рассмотрение началось и закончилось с понятия мутации, поскольку мутации представляют собой в конечном итоге главный источник того разнообразия, с которым имеет дело генетик. В остальных разделах главы обсуждены взаимодействия, происходящие между мутантными вирусами; благодаря некоторым из этих взаимодействий в вирусную популяцию вносится дополнительное разнообразие, приводящее к новым сочетаниям генетической информации. В нашем понимании генетики вирусов животных произошел заметный прогресс и .все-таки каждый новый факт подчеркивает зачаточный уровень наших знаний.
Перспективы на будущее обнадеживают. Вероятно, со временем генетический анализ вирусов животных в еще большей степени будет направлен на выяснение механизмов, ответственных за определенные явления. Для решения поставленных вопросов будут применяться недавно разработанные методы. Разработка новых приемов будет способствовать развитию плодотворных исследований, и поэтому можно надеяться на значительный прогресс в данной области. Наконец, в книге, основной направленностью которой являются вирусные болезни человека, нелишне заметить, что генетический подход теперь начинают применять к вирусам, имеющим клиническое значение, а это обещает привести нас наконец к пониманию генетических и молекулярных основ вирусных заболеваний.
Литература
1. Abel Р. (1962). Multiplicity reactivation and marker rescue with vaccinia virus, Virology, 17, 511—519
2. Ahmed R., Fields В. N. (1981). Reassortment of genome segments between reovirus defective interfering particles and infectious virus: Construction of temperature-sensitive and attenuated viruses by rescue of mutations from DI particles, Virology, 111, 351—363.
3. Ahmed R., Canning W. М., Kauffman R. S., Sharpe A. H„ Hallum I. V., Fields B. N. (1981). Role of the host cell in persistent viral infection: Coevolution of L cells and reovirus during persistent infection, Cell, 25, 325— 332.
4. Ball L. A., While C. N. (1976). Order of transcription of genes of vesicular stomatitis virus, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73, 442—446.
5. Benjamin T. L. (1970). Host range mutants of polyoma virus, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 67, 394—399.
6. Bishop D. H. L. (1978). Genetic potential of hunyavirus, Curr. Top. Microbi-
ol. Immunol., 86, 1—33.
7. Botchan М., McKenna G., Sharp P. A. (1974). Cleavage of integrated SV40 by RI restriction endonuclease, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 38, 383-395.
8. Boursnell М. E. G., Mautner V. (1981). Recombination in adenovirus: Crossover sites in intertypic recombinants are located in regions of homology, Virology, 112, 198—209.
9. Bratt M. A., Hightower L. E. (1977). Genetic and paragenetic phenomena in paramyxoviruses. In: Comprehensive Virology, Vol. 9, ed. by H. Fraenkel-Conrat and R. R. Wagner, pp. 457—533, Plenum Press, New York.
10. Brockman W. W., Gutai M. W., Nathans D. (1975). Evolutionary variants of
simian virus 40: Characterization of cloned complementing virus, Virology, 66, 36—52. ,
11. Brown S. М., Ritchie D. A., Subak-Shafpe I. H. (1978). Genetic studies with herpes simplex virus type 1: The isolation of temperature-sensitive mutants their arrangement into complementation groups and recombination analysis leading to a linkage map, J. Gen. Virol., 18, 329—346.
12. Burge B. W., Pfefferkom E. R. (1966). Phenotypic mixing between group A arboviruses, Nature (Lond.), 210, 1397—1399.
13. Burnet F. M. (I960). Principles of Animal Virology, 2d ed., Academic Press, New York.
14. Chakraborty P. R„ Ahmed R., Fields B. N. (1979). Genetics of reovirus: The relationship of interference to complementation and reassortment of temperature-sensitive mutants at nonpermissive temperature, Virology, 94, 119—
