Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 55

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 224 >> Следующая

Рис. 6.3. Схема количественного определения ДИ-частиц по образованию фокусов. Это наиболее чувствительное биологическое определение ДИ-частиц впервые разработано для вируса лимфоцитарного хориоменингита (LCV) [129]. Монослой высокочувствительных клеток заражали вирусом-помощником при низкой множественности и обрабатывали различными разведениями культуральных жидкостей или гомогенатов ткани, содержащих ДИ-частицы. Если единичная ДИ-частица поражает клетку, то эта клетка и клетки, окружающие ее, защищены от разрушения вирусом, так как ДИ-частица а модифицируется и распространяется в окружающие клетки, образуя неровные клеточные колонии на фоне мертвых или умирающих клеток. Такие определения «негативных» бляшек лучше проводить с медленно растущими умеренными вирусами; они очень трудно воспроизводятся с быстро реплицирующимися более вирулентными вирусами или со слабо интерферирующими ДИ-частицами. Эти тесты (если только они возможны) чрезвычайно чувствительны, хотя некоторые фокусы так малы и так неровны, что их нельзя четко отличить от групп умирающих клеток в моиослое.
Интегрированные дефектные вирусные геномы
Выяснение Львовым природы индукции и лизогении бактериофагов в начале 50-х гг. [106] не только вызвало революцию в генетике и биологии в целом, но и привело к признанию того, что вирусы играют важную роль в эволюции их хозяев. Лизогенные вирусы могут переносить гены клетки-хозяина путем ограниченной трансдукции (переноса ограниченного числа генов, прилегающих к специфическим участкам интеграции) или генерализованной трансдукции (переноса генов из любой области
:ромосомы). Они могут инактивировать гены клетки-хозяина [ли способствовать их экспрессии, придавать новые (кодирование вирусными генами) генетические свойства путем конверсии, (водить, устранять и (или) перемещать регуляторные элементы, ¦акие как вставочные последовательности (IS-элементы, от англ. nsertion sequences) и транспозоны, а также способствовать ре-сомбинационным изменениям ДНК клетки-хозяина.
Наибольшие усилия и внимание исследователей сосредоточен ш на недефектных лизогенных фагах, особенно на фаге X. Вместе с тем существуют весомые доказательства, что в бактериаль-шх клетках широко распространены интегрированные дефект-ше геномы фагов и что они могут эволюционировать совместна : клетками и при этом влиять на эволюцию последних (а также ia эволюцию недефектных вирусов, плазмид, транспозонов и г. д., которые проникают в эти клетки). Дефектные фаги можно легко индуцировать и наблюдать в различных штаммах бактерий. Индукцию осуществляют митомицином С, УФ-светом или другими агентами, способными индуцировать литическую репликацию умеренных фагов лизогенных бактерий. При этом часто индуцируется образование неинфекционных частиц, неотличимых эт бактериофагов или отдельных частей фагов, таких как пустые головки, полные головки, хвосты, оболочки и т. д. Эти индуцированные частицы фагов или их фрагменты нередко проявляют бактерицидную активность, вызывая гибель некоторых чувствительных штаммов бактерий [21, 104]. Экспериментами по спасению маркера можно показать, что многие маскированные дефектные фаги, интегрированные с геномом бактериальной клетки, содержат функционирующие фаговые гены, так как последние способны рекомбинировать с геномом суперинфицирующих родственных фагов и нормально функционировать в образующемся рекомбинантном фаговом потомстве. Кроме того, существует бесчисленное количество дефектных фаговых геномов, интегрированных с бактериальными хромосомами, плазмидами и т. д., которые не удается определить с помощью спасения маркера, индукции, иммунитета к суперинфекции или другими простыми способами. Тем не менее эти «молчащие» дефектные гены фагов могут при определенных условиях в значительной степени влиять на выживаемость и эволюцию их клеток-хозяев.
В последние годы было обнаружено, что глубокое генетическое и биологическое влияние на своих хозяев могут оказывать также дефектные вирусы животных и человека. Как уже обсуждалось в гл. 5, значительная часть онкогенных РНКтСодержащих опухолеродных вирусов — это дефектные вирусы, зависящие от вирусов-помощников и несущие клеточные опс-тты, рекомбинированные с фрагментами вирусных генов [15]. В других случаях длинные концевые повторы (LTR-последовательности) де-
фектных ретровирусов могут действовать как IS-элементы и активировать клеточные ояс-гены при встраивании неподалеку от лих [113, 121]. Введение ДНК из опухолей человека в чувствительные к трансформации клетки в культуре ткани позволило идентифицировать ряд опс-теяов, которые могут быть связаны с развитием опухолей человека, причем данная связь имеет ткане-.специфический характер. Эти гены оказались такими же one-генами или семействами генов, как те, которые были «захвачены» РНК-содержащими опухолеродными вирусами [153]. По-видимому, многие дефектные провирусы приобретают различные опс-гены и во время заражения переносят их в клетки хозяина. Эти ояс-гены обычно функционируют под контролем клеточных регулирующих программ, но могут вызвать злокачественное перерождение в случае, если изменятся или попадут под действие новой регуляции в составе генома дефектного вируса (или в перестроенной хромосоме невирусных опухолей). Эти взаимодействия генов дефектных вирусов и клеток обнаружены благодаря интересу к канцерогенезу, а также возможности выявлять такие взаимодействия по клеточной трансформации. Есть основания полагать, что дефектные гены должны аналогичным образом широко взаимодействовать с бесчисленным количеством других генов млекопитающих и что они в сущности являются частью нашего генетического фонда.
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed