Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
A/DU<X/U!®/63 *
А/ПКЖ/1Л®/63 b А/МГ/60/68 ¦ A/MEM/102/72 A/VIC/3/75 A/PR/8/34 А/JAP/305/57 A/W31/33 A/FPV/B0S/34 A/BSJJMY/42 A/WEISS/43 B/LEE/40 B/KD/59 B/HK/8/73 C/JCHAN/1/бб
Sendai
SV5
MV
Рис. 4Л8. Аминокислотные последовательности фузионных пептидов [13, 28, 36,
49, 50, 57, 58, 72, 76, 78, 93, 95, 105, 130]. Первые 12 последовательностей представляют собой N-коицевые участки НА2 вируса гриппа А, следующие три — последовательности вируса гриппа В, последняя строка в этой группе— фузионный пептид вируса гриппа С. Незаполненные позиции обозначают, что имеет место полная гомология с гемагглютинином Aichi (1968) (первая строка). Вторая группа последовательностей представляет N-концевые участки белка F1 парамиксовирусов. Для максимального совпадения с последовательнйстями НА вируса гриппа эти последовательности сдвинуты, так что они начинаются с позиции 2. Остатки, совпадающие у НА Aichi (1968) и белка F1 вируса Сендай, подчеркнуты.
лотные последовательности фузионных пептидов вирусов гриппа и парагриппа; видно, что эти последовательности гидрофоб-ны и обогащены глицином.
Как видно из рис. 4.14, Л и 5, фузионный пептид на N-конце НА2 располагается между мономерами в тримере НА. Он находится на расстоянии 35 А от конца молекулы, направленного в сторону вирусной мембраны, и на расстоянии 100 А от противоположного конца, несущего участок, который связывается с сиаловой кислотой на мембране клетки-мишени. Такая локализация предполагает, что при низком pH молекула претерпевает конформационные изменения, в результате которых происходят экспонирование фузионного пептида и, возможно, сближение вирусной мембраны и мембраны клетки-мишени [129].
ILE
1L?
QjY THR
QjY GLN VM,
C2jY THR
LEU VAL
QjY THR --------
C2jY THR --- --- -
PHE LEU GLY ALA HIS
fflE LEU GLY ALA HIS
PHE LEU GLY ALA HIS
ILE ILE (ASP)LEL ILE -
ffiE ?В? ?? ЫД VAL ILE ?? THR ILE ALA LEU ?Ut VAL ALA THR ALA ALA GLN ILE WR---------------------------------------------------------------------------
ALA VAL LEU ALA V» -----
ILE ILE GLY VAL -------------
Конформационные изменения, наблюдаемые в ВНА1, происходят при том же самом, оптимальном для слияния, низком значении pH [94]. При pH 5,0 фузионный пептид ВНА экспонируется и получает возможность вступать в новые гидрофобные взаимодействия. In vitro ВНА при низком pH агрегирует с образованием белок-белковых мицелл, сходных с теми, которые формируют мембранные белки, несущие интактный заякоривающий пептид (напомним, что ВНА — это НА, лишенный заякориваю-щего пептида). Агрегацию ВНА при низком pH можно предотвратить, включив его в мицеллы неионного детергента или в липидные везикулы. Если удалить фузионный пептид, то агрегации ВНА, а также связывания с мицеллами детергента или с липидным бислоем не происходит. Обработка ВНА термолизином в конформации, свойственной ему при низком pH, приводит к отщеплению аминокислот 1—23, а также к утрате приобретенных при низком pH гидрофобных свойств [26]. Это прямо указывает на то, что N-концевой фузионный пептид НА2 является гидрофобным участком, который экспонируется в результате кон-формационных изменений при низких pH. Дальнейшие подтверждения важной роли конформационных изменений ВНА при низком pH были получены в опытах по расщеплению ВНА трипсином, показавших, что пептидные связи в позициях 27 и 224 НА1, обычно спрятанные в структуре тримера, экспонируются при низком pH. Фактически всю верхнюю часть молекулы НА1 (с 28 по 328 остаток) можно отделить от нерастворимого НА2 и части НА1 (остатки 1—27) после обработки белка, находящегося в конформации, принимаемой им при низком pH, трипсином (рис. 4.19) [94]. Эти результаты позволяют предположить, что конформационные изменения, активирующие слияние мембран, захватывают как ту стволовую часть молекулы НА2, где N-конец погружается во внутреннюю область тримера, так и участки НА1, контактирующие со «стволом». Как свидетельствуют данные КД, глобулярная структура домена на вершине ВНА, по-видимому, сохраняется после обработки трипсином при низком pH; об этом свидетельствует также способность упомянутого домена связываться с моноклональными антителами, специфичными для его конформации при нормальном pH (см. следующий раздел).
Как происходит слияние мембран вируса и клетки-мишени после конформационных изменений НА, индуцированных низким pH, — пока неясно. Поскольку вирус гриппа может сливаться с искусственными липосомами, не имеющими белков и рецепторов, несущих сиаловую кислоту, можно предположить, что мем-
