Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
Другой тип регуляции характерен для LTR MMTV. Уже давно было замечено, что обработка клеток, зараженных MMTV, глюкокоршкоидами ведет к резкому усилению вирусной экспрессии. Сейчас известно, что такой ответ зависит от особого участка, расположенного в области U3 LTR MMTV и связывающего рецептор глюкокортикоидов [112, 134, 153].
Как отмечалось выше, первичным продуктом транскрипции провируса является полноразмерная молекула РНК. Вирусная РНК обычно составляет от 0,1 до 1% тотальной клеточной РНК, и может достигать 20% по ли аденилиров ан пой РНК зараженных клеток. У полноценных вирусов эта РНК, как и ее процеосиро-ванные варианты, выполняет две главные функции:- формирует вирионную РНК и служит мРНК для синтеза продуктов генов gag, pol и env. Около половины полноразмерной РНК упаковывается в вирионы, остальная служит мРНК. В клетках обычно содержится несколько больше мРНК для gag, чем для env, причем продукта гена gag синтезируется примерно в 20 раз больше» чем продукта гена pol [45, 170]. Каждый из вирусных генов детерминирует синтез иолипротеина-предшественника, который затем разрезается по крайней мере на два зрелых полипептида. Процессинг предшественников тесно связан со сборкой вирио-нов и обсуждается в следующем разделе. Структура мРНК вирусных генов описана ниже.
мРНК для продуктов гена env —результат сплайсинга пол-
норазмерной РНК, из которой удалена большая часть последовательностей генов gag и pol (рис. 13.1). Одна из интересных особенностей этой мРНК состоит в том, что ее акцепторный сайт сплайсинга, а также часть mu-кодирующих последовательностей расположены перед терминирующим кодоном гена pol; открытые рамки генов env и pol находятся в разных фазах [79, 155, 158, 165, 186]. Д опорный сайт сплайсинга у MuLV находится перед геном gag, в то время как у RSV — непосредственно вслед за инициирующим кодоном гена gag. Поэтому у RSV трансляция начинается с кодона AUG гена gag, а у MuLV — с кодона AUG, входящего в состав перекрывающихся участков pol и env [155].
До сих пор не выявлено различий между вирианвой РНК и РНК, которая служит матрицей для синтеза продуктов gag и pol. Тем не менее времена их полужизни различаются, что указывает на различие их путей метаболизма внутри клетки [105]. Продукт гена pol синтезируется 'В виде длинного слитною полипротеина gag-pol. С большинства же молекул полноразмерной мРНК транслируется лишь продукт гена gag. Пока неизвестно, чем определяется это различие в трансляции двух генов, ясно лишь, что RSV и MuLV решают эту проблему по-разному. У RSV открытые рамки для gag и pol находятся в разных фазах, что указывает на возможное участие сплайсинга в образовании матрицы для смешанного продукта ga*g-pol [155]. У MuLV рамки генов gag и pol находятся в одной фазе и разделены одним стоп-кодоном (амбер-кодоном UAG) [79, 165, 186]. Поэтому слитный продукт gag-pol может транслироваться либо со оплайсирован-ной мРНК, либо непосредственно с интактной полноразмерной в случае супрессии амбер-кодона.
Гены v-onc экспрессируются сходно с «обычными» .вирусными генами, поскольку находятся под тем же вирусным и клеточным контролем. Как уже отмечалось, большинство генов v-ояс являются слитными с генами gag и кодируют гибридные продукты gag-one, у которых N-концевая часть кодируется геном gag, а С-шнцевая — онкогеном. Последовательности онкогенов в этих слитных генах могут замещать большую или меньшую часть гена gag, детерминирующую С-конец, и соответственно их экспрессия контролируется аналогично этому гену. Естественно предположить, что место стыка последовательностей gag и one находится перед терминирующим кодоном gag потому, что ген pol транслируется менее эффективно, чем gag.
Фаза V: синтез вирусных белков и сборка вирионов
После завершения синтеза и процессинга РНК необходим синтез вирионных белков, которые собираются в частицы, оодер-
жащие вирионную PH,К [43, 45, 128, 170]. Оболочка вир,иона образуется на плазматической мембране «летки, поскольку вирус-освобождается' из клетки почкованием. Сердцевины вирусов С-типа формируются в непосредственной близости от мембраны,, тогда как у ретровирусов В- и D-типов «апсиды, по-видимому, образуются в цитоплазме. О синтезе, процессинге и модификации вирусных белков накоплена обширная информация. Гораздо меньше изучена оборка вир ионов. Как будет ясно из дальнейшего изложения, точная локализация белков в составе ви-риона неизвестна.
• Синтез белков и оборка вир ионов идут сходным образом у разных видов ретровирусов, несмотря на то что молекулярные массы белков, выполняющих одни и те же функции, могут существенно различаться. Здесь в качестве примера мы рассмотрим MuLV. У вирусов этой группы .нарезание полипротеинов-предшественников происходит в основном уже после сборки вирионов, поскольку свежесобранный вирус несет много неразрезанных предшественников [13]. Это наблюдение позволяет предположить, что последовательность белков в полипротеине имеет значение для их относительного расположения в составе вириона. ¦
Из продуктов гена gag образуются все белки 'сердцевины вириона, за исключением ревертазы. Их одних достаточно, чтобы сформировать вирион, правда, неиифекционный. В случае MuLV белок-предшественник, кодируемый геном gag, имеет мол. массу 65 >кДа (Pr65gag). Он нарезается на 4 белка, расположенные в. такой последовательности: NH2—р 15—рр 12—рЗО—р 10—СООН. Неясно, какой фермент осуществляет это нарезание — клеточная или вирусная протеаза. Белки gag MuLV существуют в гликози* лированной и неглйкозилированной формах. Гликозилирован-ные белки нарезаются из gPr80gag, который начинает транслироваться с AUG-кодона, расположенного перед другим AUG-ko-доном для негликозилированноло Pr65gag. У вирусов ASLV гли-козилированные продукты gag неизвестны. Делеционные (мутанты MuLV, неспособные синтезировать gPr80gag, тем не менее инфекционны [51, 157], что ставит под .вопрос биологическую значимость гликозилированных форм.
