Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
логичен трансформирующему фрагменту HSV-1 (mirI). Это удивительно, если учесть, что HSV-1 и HSV-2 структурно и функционально колинеарны. По-видимому, механизм трансформации клеток у этих двух вирусов различен. Интересно, что трансформирующие фрагменты HSV-1 и HSV-2 не содержат ни одного из ранних генов альфа-герпесвирусов. Это еще раз подтверждает гипотезу о том, что механизм трансформации клеток с помощью герпесвирусов радикально отличается от механизмов трансформации^ с помощью Ру, SV40 и Ad, у которых для инициации трансформации и ее сохранения нужны функции ранних генов. Хотя трансформирующие фрагменты HSV-2, видимо, необходимы для инициации трансформации, данных о наличии в трансформированной клетке специфических последовательностей вирусной ДНК нет. -
Отсутствие вирусных генов в клетках, трансформированных HSV-2, приводит к выводу, что вирусная ДНК не нужна для поддержания трансформированного фенотипа. Однако, если учесть, что возможности современных методов весьма ограничены, трудно исключить присутствие небольшого сегмента вирусной ДНК длиной 1—3 kb, который мог бы кодировать трансформирующую функцию. Для объяснения механизма трансформации клеток вирусами HSV-1 и HSV2 был предложен упоминавшийся механизм «порази-и-беги» [78]. Так, трансформация может быть косвенным следствием мутагенной активности вирусного гена или может произойти в результате активации какого-то клеточного онкогена. В связи с этим интересно заметить, что HSV-специфическая рибонуклеотид-редуктаза кодируется участком вирусного генома, частично перекрывающимся с mtrll и mtrlll [126]. Возможно, кратковременная экспрессия гена этого вирусного фермента оказывает мутагенное действие на клеточную ДНК, создавая дисбаланс некоторых дезоксирибонуклео-зидтрифосфатов во внутриклеточном пуле и, следовательно, нарушая точность репликации ДНК- Совсем недавно было показано, что фрагмент ДНК HSV-2 из 700 пар оснований способен к трансформации клеток (McDougall, Galloway, личное сообщение). Этот небольшой трансформирующий фрагмент имеет структуру '«стебель—петля», аналогичную структуре IS-элемен-та. Эти данные также подтверждают, что ДНК HSV-2 осуществляет трансформацию с помощью уникального механизма, в ко-/ тором не участвуют классические вирусные трансформирующий гены.
Трансформация с помощью альфа-герпесвируса EHV-1
Герпесвирус лошадей типа 1 (EHV-1), другой член подсемейства альфа-герпесвирусов, может трансформировать эмбрио-
нальные клетки хомячка in vitro. Трансформацию клеток вирусом EHV-1 осуществляли двумя способами. В первом случае эмбриональные клетки хомячка заражали с помощью УФ-облу-ченного EHV-1 и отделяли скопления клеток с измененной морфологией [238]. Клеточные линии из этих скоплений образовывали колонии на мягком агаре и индуцировали опухоли у новорожденных хомячков и у взрослых сингенных хомячков. В разных линиях трансформированных клеток и опухолях, индуцированных у хомячков при введении им трансформированных клеток, обнаруживали от одной до четырех копий сегментов вирусного генома, составляющих 2—20% его длины. Во втором случае первичные эмбриональные клетки хомячка трнсформи-ровали вирусными штаммами, обогащенными дефектными частицами EHV-1 [237]. Трансформированные клетки сохраняли от 23 до 45 копий целого вирусного генома, а опухоли, индуцированные трансформированными клетками, содержали от двух до четырех копий сегментов вирусного генома, составляющих 40—60% его длины.
Три клеточные линии, иммортализованные с помощью трансформации УФ-облученным EHV-1, исследовали методом блот-гибридизации ДНК [236, 239]. Участки генома EHV-1 были встроены во множество мест генома клетки-хозяина. При этом во всех линиях трансформированных клеток присутствовала по крайней мере одна копия участка генома, расположенного в области 32—38 единиц карты. Указанная последовательность (но не другие участки вирусной ДНК) обнаруживалась на протяжении 100 клеточных пассажей. Эти данные свидетельствуют о возможном существовании интегрируемых специфических вирусных последовательностей, связанных с сохранением онкоген-ного фенотипа у клеток, трансформированных с помощью EHV-1.
Трансформация с помощью бета-герпесвируса HCMV
Способностью к трансформации обладают две области генома цитомегаловируса человека (HCMV). Это следует из результатов опытов по трансфекции клонированных рестрикционных фрагментов. Авторам работы [201] удалось трансформировать клетки NIH/3T3 фрагментом NE Xbal/Hindlll (2,9 kb), который находится в области 12—14 единиц карты в молекуле ДНК про-тотипного штамма HCMV (рис. 12.8). Однако в трансформированных клетках не было обнаружено последовательностей вирусной ДНК [201]. Используя метод пассажей клеток для отбора трансформированных клонов, Клантон и др. [37] трансформировали эмбриональные клетки хомячка другим фрагментом ДНК HCMV—Е Xbal (14,3 kb), расположенным в области
68—77 единиц карты (рис. 12.8). Этот фрагмент генома HCMV (штамм Таун) частично гомологичен участку mtrlll HSV-2 ?37] (рис. 12.8). Как следует из приведенных данных HCMV сходен с HSV-2 в том отношении, что каждый из них имеет две трансформирующие области.
