Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 161

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 155 156 157 158 159 160 < 161 > 162 163 164 165 166 167 .. 224 >> Следующая

Свойства и функции большого, среднего и малого Т-антигенов полиомавирусов
Роль трех Т-антигенов вируса Ру в трансформации клеток довольно сложна (см., например, прекрасную работу [266]). По некоторым данным особенно важную роль играет средний Т-ан-
тиген. С его помощью можно трансформировать иммортализо-ванные линии клеток, однако для трансформации первичных, эмбриональных клеток в культуре его недостаточно. Начальная? стадия трансформации первичных клеток, которую называют «иммортализацией», требует присутствия N-концевого домена? большого Т-антигена. И наконец, чтобы согласовать действия.1 среднего и большого Т-антигенов в процессе трансформации, нужен малый Т-антиген. Изложим теперь экспериментальные данные, на которых основаны эти утверждения.
Клетки, трансформированные вирусом полиомы, всегда содержат средний и малый Т-антигены, но редко — весь большош Т-антиген [132]. Связано это с тем, что интегрированная вирусная ДНК часто оказывается оборванной на конце, кодирующем-С-концевой домен большого Т-антигена, поэтому синтезируется-укороченный антиген. Изучение роли индивидуальных Т-антигенов Ру в процессе трансформации клетки с помощью ДНК-фраг-ментов осложняется тем, что последовательности, кодирующие-три Т-антигена, перекрываются. Чтобы разграничить функции Т-антигенов, были сконструированы рекомбинантные плазмиды,, содержащие модифицированные ранние области Ру, которые кодировали монофункциональные Т-антигены. В плазмиде, детерминирующей средний Т-антиген и не детерминирующей большой и малый, были удалены последовательности интрона среднего Т-антигена; при этом были удалены акцепторы сплайсинга» мРНК большого и малого Т-антигенов. Поскольку для синтеза мРНК среднего Т-антигена сплайсинг не обязателен, этот синтез-протекал нормально [288]. Трансфекция иммортализованной линии крысиных клеток плазмидой, кодирующей лишь средний Т-антиген, привела к образованию трансформированных клеточных линий, которые формировали колонии в полужидкой среде-и индуцировали опухоли у крыс, т. е. обладали двумя основными признаками, характерными для трансформированного состояния’ [227, 288]. Эти работы показали, что главные трансформирующие функции Ру обеспечивает средний Т-антиген, т. е. он ответствен именно за такие изменения в клеточных механизмах регуляции, которые чаще других встречаются у полностью трансформированной клетки. Однако трансформированные клетки, полученные путем трансфекции плазмидой, кодирующей средний: Т-антиген, отличаются от клеток, трансформированных плазмидой, кодирующей все три Т-антигена. Первые не способны расти* в среде с малым количеством сыворотки (0,5%), хотя в среде,, содержащей 10% сыворотки, они растут хорошо. Таким образом,, в обедненной сывороткой среде преимущественно из-за ограниченного количества специфических факторов роста трансформированные средним Т-антигеном клетки становятся по своим свойствам похожи на нетрансформированные [227]. Способность со-
хранить трансформированное состояние в обедненной сывороточными факторами роста среде эти клетки приобретали при последующей трансфекции плазмидой, кодирующей интактный большой Т-антиген или 40% N-концевых остатков большого Т-антигена. Трансфекция плазмидой, кодирующей малый Т-антиген Ру, не устраняла зависимости от содержания сыворотки в среде. Таким образом, экспрессия N-концевой части большого Т-антигена может дополнять трансформирующую функцию среднего Т-ант^-гена; это свидетельствует о том, что при низком содержании сыворотки в среде большой Т-антиген играет какую-то роль в поддержании клеток в трансформированном состоянии.
В экспериментах, направленных на дальнейшее исследование ¦функций индивидуальных Т-антигенов Ру, первичные фиброблас-ты мышиных и крысиных эмбрионов трансфицировали плазмидами, несущими разделенные гены большого, среднего и малого Т-антигенов. Плазмида, содержащая всю раннюю кодирующую область Ру, трансформировала первичные клетки, а плазмида ч кодирующая только средний Т-антиген, — нет [227]. Самое интересное, что трансфекция первичных клеток грызунов плазмидой, несущей лишь ген большого Т-антигена, приводила к образованию плоских колоний в разреженных культурах с той же частотой, что и трансформация клеток инфекционным вирусом [228]. Клеточные линии, полученные в результате трансфекции плазмидой, которая содержала ген большого Т-антигена, имели •нормальный фенотип, т. е. характеризовались низкой плотностью •насыщения на пластиковой подложке и не были способны к размножению в полужидкой среде (без возможности прикрепления к подложке). Однако те же линии могли расти при более низкой концентрации сыворотки в среде, чем спонтанные клеточные линии грызунов. Способность большого Т-антигена к иммортализа-дии клеток сохраняется и у одного N-концевого домена, что следует из экспериментов по трансфекции плазмидой, кодирующей только левые 40% большого Т-антигена Ру. О перманентной потребности в функционировании большого Т-антигена для поддержания иммортализованного состояния свидетельствуют результаты экспериментов с ^s-мутантами, кодирующими термолабильный большой Т-антиген [228].
Предыдущая << 1 .. 155 156 157 158 159 160 < 161 > 162 163 164 165 166 167 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed