Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
тип клетки. Малый Т-антиген SV40 в иммортализации не участвует [40].
Большой Т-антиген SV40 — это замечательный полифункцио-нальный белок (более подробно см., например, в работе [235]). Его биохимические свойства достаточно хорошо изучены благодаря тому, что сейчас удается получать в заметном количестве очищенные препараты этого белка и родственных ему гибридных белков [110, 284]. В табл. 12.6 перечислены функции, приписываемые этому белку. Домены большого Т-антигена, которые отвечают за некоторые из этих функций, картированы. Чрезвычайно полезными для работ по картированию оказались эксперименты по переносу генов плазмидами, содержащими ДНК SV40 со специфическими делециями [222, 268].
Таблица 12.6. Молекулярные функции большого Т-антигена SV40
Функция Область гена Т-анти
гена, ответственная
за данную функцию
(по номерам нуклео
тидов)
Специфическое связывание с вирусной ДНК 4600---4000
Инициация репликации вирусной ДНК 4600---4000 (?)
Ауторегуляция ранней вирусной транскрипции 4600---4000 (?)
Индукция поздней вирусной транскрипции Неизвестна
АТРазная активность »
Протеинкиназная активность (?) »
Связывание с клеточной ДНК 4100---3800
Инициация репликации клеточной ДНК ?
Связывание с белком р53 Неизвестна
Активация транскрипции рДНК 3800---3500
Индукция синтеза клеточных ферментов Неизвестна
Активация транскрипции
клеточных генов
РНК-полимеразой II
Трансформация клеток вирусом SV40 — это сложный процесс, включающий множественные перестройки различных областей клетки. Пока не удается связать специфические биохимические свойства большого Т-антигена SV40 с определенными биологическими характеристиками трансформированной клетки. Для объяснения механизма действия вирусных трансформирующих белков предложено две гипотезы (более подробно см. в работе [184]). Одна из них состоит в том, что трансформирующие белки «работают» на плазматической мембране, модифицируя специфические функции, существенные для роста клеток. Согласно второй гипотезе, трансформирующие белки функционируют в ядре и осуществляют регуляцию репликации ДНК и экспрессии генов. Известные свойства большого Т-антигена SV40 совмести-
:мы с обеими гипотезами. Основная часть молекул большого 'T-антигена находится в ядре трансформированной клетки, где они связаны с нуклеоплазмой, хроматином и ядерным матриксом [271]. Функционирование в ядре согласуется а) с изменениями синтеза макромолекул, наблюдаемыми в клетках, трансформированных SV40, в частности со стимуляцией репликации клеточной .ДНК [283]; б) с повышением синтеза рибосомной РНК [127];
в) с индукцией синтеза клеточных ферментов [223]; г) с актива-\ цией транскрипции специфических клеточных генов [257, 258]; л) со специфическим связыванием с клеточным белком р53, находящимся в ядре.
р53 — это связанный с трансформацией клеточный белок. Впервые он был обнаружен в составе прочного комплекса с большим Т-антигеном SV40 в трансформированных мышиных клетках [163]. Аналогичный комплекс образуется между каким-то иммунологически неотличимым от р53 белком и большим 'T-антигеном Е1В Ad [250]. Последние работы подтверждают участие белка р53 в регуляции клеточного роста [190].
«Мембранное» функционирование большого Т-антигена SV40 в процессе трансформации подтверждается тем, что минорная ¦фракция (модифицированная форма) большого Т-антигена локализуется в плазматической мембране клеток, трансформированных SV40. По-видимому, С-концевой домен большого Т-антигена :SV40 погружен в мембрану, а N-концевой располагается на поверхности клетки [50]. Вероятно, именно присутствием большого Т-антигена SV40 на клеточной поверхности и объясняется усиленный перенос питательных веществ через мембрану, который наблюдается у клеток, трансформированных SV40. Возможно, с этим связана и способность трансформированных клеток расти в обедненной сывороткой среде. Интересно также, что большой Т-антиген SV40 прочно связан с клеточным белком р53 как на поверхности, так и внутри трансформированных клеток [248]. Может быть, взаимодействие большого Т-антигена с р53 на поверхности клетки играет решающую роль в поддержании клеток в трансформированном состоянии. К сожалению, пока невозможно отличить изменение биологических и биохимических свойств, индуцируемых большим Т-антигеном SV40 и существенных для процесса трансформации, от изменений, представляющих собой последствия того, что клетка трансформирована.
