Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 159

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 224 >> Следующая

Полиомавирусы
Организация и экспрессия трансформирующих генов у SV40 и у вируса полиомы
Геномы SV40 и Ру хорошо охарактеризованы. Они представляют собой ковалентно замкнутые кольцевые молекулы ДНК, нуклеотидная последовательность которых полностью установлена [285]. На рис. 12.2 приведены физические карты геномов SV40 и Ру, на которых показано расположение последовательностей, кодирующих вирусные белки. Вирусный геном подразделяют на 100 единиц, нумеруя их по часовой стрелке и произвольно выбирая за начало отсчета сайт рестрикции эндонуклеазой ¦EcoRI. Ori — это сайт инициации двунаправленной репликации ДНК- Ранняя область соответствует половине вирусного генома, транскрибируемой в направлении против часовой стрелки у SV40 и по часовой — у Ру. При продуктивной вирусной инфекции пермиссивных клеток ранние вирусные гены экспрессируются до начала репликации вирусной ДНК; эти ранние гены детерминируют трансформирующие функции вируса. После начала репликации транскрибируются поздние вирусные гены, при этом направление транскрипции меняется на противоположное. Поздние вирусные гены кодируют три вирусных капсидных белка — VP1, VP2 и VP3, которые в трансформации клетки не участвуют.
При инфекции непермиссивных или полупермиссивных клеток
>ис. 12.2. Генетические карты, на которых указаны области, кодирующие Т-нтигены SV40 и Ру, и вирусные структурные белки (VP). Вирусный геном 1азбит на 100 частей (единиц карты), пронумерованных против часовой стрел-и; за начало отсчета принят уникальный .EcoRI-сайт рестрикции. Ori — точка, которой начинается двунаправленная репликация ДНК. Ранняя область, ко-[ирующая Т-антигены, находится в той части вирусного генома, которая транс-:рибируется у SV40 в направлении -против часовой стрелки от ori, а у Ру — [О часовой стрелке. Области, кодирующие Т-антигены, показаны черными :т,релками; пунктиром выделены янтроны. Матрицами большого и малого Т-а,н-'игенов SV40 служат две разные молекулы мРНК, происходящие от общей юлекулы РНК-предшественницы. Оба Т-антигена SV40 до сайта сплайсинга -ранслируются с рамкой считывания 1. После сайта сплайсинга трансляция Зольшого Т-антигена продолжается с рамкой считывания 2. Матрицами боль-пого, среднего н малого Т-антигенов Ру служат три по-разному сплайсиро-занные молекулы мРНК. До сайта сплайсинга все три Т-антнгена транслируется с рамкой считывания 1. После сайта сплайсинга средний Т-антиген транслируется с рамкой считывания 2, а большой Т-антиген — с рамкой :читывания 3.
экспрессируется ранняя область вирусного генома, несущая трансформирующие гены. В хозяйских клетках индуцируется :интез клеточной ДНК, может осуществиться несколько актов целения и временно проявиться свойства, характерные для трансформированного фенотипа. Это явление называют абортивной трансформацией', оно носит преходящий характер, поскольку большинство клеток теряет вирусную ДНК и возвращается к нормальному фенотипу. Однако незначительная часть клеток стабильно интегрирует и непрерывно экспрессирует вирусные ранние гены, т. е. эти клетки остаются стабильно трансформированными.
Ранняя область SV40 и Ру кодирует вирусные Т-антигены. Т-антигены — это по определению белки, синтезируемые инфицированными и трансформированными клетками, реагирующие с сывороткой животного, у которого данным вирусом индуцирована опухоль. Несмотря на чрезвычайное сходство в организации вирусных геномов SV40 и Ру, эти вирусы заметно различаются по устройству ранних генов и по числу кодируемых каждым ви-
русом Т-антигенов (см. рис. 12.2). SV40 кодирует два Т-антиге-на: большой, с мол. массой 94К, и малый, с мол. массой 17К. Ру кодирует три Т-антигена: большой, средний и малый, мол. массы которых равны 100К, 55К и 22К соответственно. Т-антигены SV40 и Ру транслируются с индивидуальных мРНК- Эти мРНК происходят от одного первичного транскрипта, сплайсинг которого может осуществляться двумя или тремя альтернативными способами.
Большой и малый Т-антигены SV40 имеют общий N-концевой участок (рис. 12.2), а С-концевая область малого Т-антигена SV40 кодирована в интроне, который во время сплайсинга мРНК, кодирующей большой Т-антиген, отщепляется. Аналогичным образом одинакова N-концевая последовательность и у большого, малого и среднего Т-антигенов. Но малый и средний Т-антигены Ру, кроме того, содержат участки, отсутствующие у большого Т-антигена, поскольку они детерминируются интроном, который у мРНК, кодирующей большой Т-антиген, отщепляется при сплайсинге. С-концевую часть молекулы среднего Т-антигена Ру кодирует уникальный участок, расположенный дистал^но от места выщепления интрона; этот участок транслируется с другой рамкой считывания, чем в случае большого Т-антигена (рис. 12.2). Геном SV40 имеет эквивалентный участок с открытой рамкой считывания в 3'-концевой ранней области [183], но пока не удалось идентифицировать ни одного белка SV40, который кодировался бы этой областью.
Свойства и функции большого и малого Т-антигенов SV40
Исследования температурочувствительных (^s) мутантов SV40, несущих мутации в области, кодирующей большой Т-антиген, и мутантов с делениями в области, кодирующей малый Т-антиген, привели к следующим выводам: а) большой Т-антиген нужен для инициации клеточной трансформации; б) для поддержания у клетки трансформированного фенотипа необходима непрерывная экспрессия большого Т-антигена; в) малый Т-антиген для трансформации не нужен, но в определенных условиях он, вероятно, играет роль усилителя. Большой Т-антиген SV40 состоит по крайней мере из двух функциональных доменов. Трансфекцией рекомбинатными плазмидами, кодирующими лишь N-концевую часть большого Т-антигена SV40, удается достичь иммортализации культур фибробластов крысиных эмбрионов и их неограниченного деления [38, 40]. Иммортализованные клеточные линии по своим фенотипическим признакам варьируют от нормальных до трансформированных; это обусловлено в основном различиями во вкладе продуктов клеточных генов в фено-
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed