Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
мРНК SV40 [как ро1у(А+), так и poly (А-)] связана с цитоскелетом [6]. Она появляется на цитоскелете, минуя растворимую фазу. Это означает, что от ядра до цитоплазмы мРНК может перемещаться, будучи связанной со структурными элементами клетки. Интересно, что при этом время жизни молекул poly(A^), транскрибируемых с различных областей ДНК, больше, чем время жизни молекул ро!у(А+). Как и мРНК VSV, мРНК SV40 временно связана с цитоскелетной основой. Через несколько часов она высвобождается в растворимую фазу, но там больше не транслируется. Следовательно, для трансляции необходимо, чтобы мРНК была связана со скелетной основой.
Аденовирус — крупный ядерный вирус, лишенный оболочки
О связи метаболизма аденовируса с элементами скелета клетки известно сравнительно мало. Это, в частности, объясняется тем, что аденовирусные белки образуются в избыточном количестве. Фракционирование зараженных аденовирусом клеток на растворимую фракцию, цитоскелет, хроматин и ядерный матрикс показывает, что, хотя во многих отношениях результаты не отличаются от случая незараженных клеток, тем не менее в каждой фракции в большом количестве присутствуют вирусные белки (неопубликованные данные). По-видимому, для вирусного метаболизма существенны лишь некоторые из этих белков, но о механизмах транспорта и сборки частицы в настоящее время известно мало. Судя по некоторым ранним микрофотографиям, зрелые аденовирусы так же хорошо связываются с ядерным матриксом, как и папилломавирусы. Аденовирусная РНК также присоединяется к ядерному матриксу, но активная аденовирусная мРНК связана с цитоскелетом в составе полирибосом [47].
Взаимодействие аденовируса с системами клеточных филаментов— микротрубочками — исследовалось in vivo и in vitro
Люфтигом и др. [34, 35]. В этих пионерских работах, где применялась электронная микроскопия залитых тонких срезов, было показано, что аденовирус, по-видимому, связывается с цитоплазматическими микротрубочками. Обнаружилось также, что in vitro частицы аденовируса связываются с очищенными (собранными in vitro) микротрубочками. Значение такого связывания пока неясно; известно только, что микротрубочки причастны к транспорту и скачкообразным перемещениям органелл. Такие опыты in vitro помогают наметить пути будущих подходов к изучению биохимии связывания вирионов с субклеточными структурами.
Вирус герпеса — ядерный вирус, снабженный оболочкой
Вирус герпеса активно использует клеточные структуры. Этот крупный ДНК-содержащий вирус собирается в ядре, а затем почкуется через ядерную и далее через плазматическую мембрану. Давно известно, что архитектура зараженной клетки-хозяина претерпевает радикальную перестройку, по-видимому, адаптированную к созреванию вируса. Эта перестройка включает марги-нацию хроматина и значительную реорганизацию ядерной оболочки. Чтобы выявить связанные с клеточными структурами стадии развития вируса герпеса, использовался описанный выше метод нанесения целого объекта без заливки с последующим биохимическим фракционированием.
Репликация и транскрипция вируса герпеса происходят в ядре, а трансляция информационной РНК — в цитоплазме, при этом РНК присоединена к цитоскелету [4, 30, 40]. После трансляции белки проникают в ядро, где в комплексе с ядерным матриксом происходит сборка вирусной частицы [8, 21]. Миграция двух вирус-специфических белков, ICP 5 и ICP 8, из цитоплазмы в ядро свидетельствует о существовании двух разных путей сборки, о которых говорилось ранее, — для вирусов, лишенных оболочки, и для вирусов с оболочкой. ICP 5 — это главный белок капсида. Своей миграцией от места синтеза к месту сборки вирусной частицы он напоминает N-белок VSV [4, 40]. Как показывает клеточное фракционирование, капсидный белок сначала связывается с цитоскелетом, а затем через некоторое время появляется в ядре, где в конце концов встраивается в вирусную частицу. По-видимому, это перемещение не сопровождается выходом белка в растворимую фазу, как у белка N VSV. Интересно отметить, что ингибирование белкового синтеза блокирует перемещение белка ICP 5 точно так же, как миграцию белка N VSV и движение элементов цитоскелета от места их синтеза в незара-женной клетке. Необходимость продолжения белкового синтеза для перемещения связанных со структурными сетями белков может служить индикатором такого способа транспорта и сборки.
В отличие от ICP 5 некапсидный ДНК-связывающий белок ICP 8 быстро перемещается от места синтеза к месту связывания в ядре (из комплекса с ДНК этот белок высвобождается путем обработки ДНКазой и солевым раствором). Он отличается от ICP 5 и тем, что в норме не связывается с ядерным матриксом, а ингибирование белкового синтеза не влияет на его миграцию. Как ни странно, этот ДНК-связывающий белок, по-видимому, все-таки связывается с ядерным матриксом, когда блокируется синтез вирусной ДНК, но если синтез ДНК возобновляется, то он покидает матрикс и связывается с вирусной ДНК [39а].
Как показывают связывание ICP 5 и электронные микрофотографии ядерного матрикса с удаленным хроматином, полученные Бен-Зе’евом и др. методом нанесения целого объекта, нуклеокап-сиды созревающих герпесвирусов прочно прикреплены к ядерно-му матриксу. На микрофотографиях видна плотная сеть волокон ядерного матрикса с присоединенными к ним нуклеокапсидами вируса герпеса (рис. 11.7).
