Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 137

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 131 132 133 134 135 136 < 137 > 138 139 140 141 142 143 .. 224 >> Следующая

Уже сейчас можно сформулировать несколько важных прин-j ципов. Оказалось, что метаболизм вирусных нуклеиновых кис-/ лот — репликация, транскрипция и трансляция мРНК — осуществляется при участии клеточных структур, цитоплазматически? или ядерных. Для белковых компонентов вирусной «фабрики»^ характерно более разнообразное поведение. Оказалось, что су-\ ществуют два совершенно разных способа упаковки вирусных \ структурных белков. В сборке вирусов, лишенных оболочки, \
Рис. 11.4. Электронно-микроскопические фотографии среза ядерного матрикса с удаленным хроматином без заливки в смолу. А. Матрикс с волокнами RNP. Б. Только матриксные белки.
*\
по-видимому, участвуют растворимые белки, а сборка вирусов, снабженных оболочкой, осуществляется иначе. Очевидно, у таких вирусов, как VSV и HSV, структурные белки не находятся в растворимой фазе и эти вирусы используют «сборочные механизмы» клетки в большей степени. Неструктурные вирусные белки, такие как полимеразы, по-видимому, ведут себя иначе.
Полиовирус — цитоплазматический вирус, лишенный оболочки
Одной из первых систем, на которой были проверены возможности использования избирательной экстракции в биохимических и морфологических исследованиях, были клетки HeLa, зараженные полиовирусом [31]. Вирусная РНК, специфически меченая в обработанных актиномицином клетках, была прикреплена к скелетной основе как во время репликации, так и при ее функционировании в качестве мРНК в полирибосомах. Полностью связанными оказались геномная и матричная 35S-PHK и двухцепочечные 205-формы. Растворимая вирусная РНК обычно появляется после лаг-периода длительностью 60 мин в виде 1355-частиц, обладающих биохимическими свойствами зрелых вирионов. В присутствии гуанидина, который препятствует выходу РНК из места репликации, блокируется высвобождение 35S-PHK из скелета [13, 27]. Высвобождение вирусной РНК начинается непосредственно перед созреванием частицы или совпадает с ним по времени.
В отличие от метаболизма РНК процессинг полиовирусного белка довольно сложен [29, 41]. Исходный крупный полипроте-ин претерпевает несколько стадий протеолитического расщепления. При этом образуются три группы белков: белки капсида, или VP, РНК-полимераза и белки, участвующие в формировании мембранных везикул, характерных для поздней стадии развития вируса.
Результаты опытов по разделению белков на растворимые и связанные со скелетом фракции далеко не однозначны. К сожалению, это характерно для применения этого метода в вирусологических исследованиях. Большинство белков встречается как в связанной, так и в свободной форме [49]. При этом большинство белков капсида быстро высвобождается из скелетной сети, тогда как примерно половина всех предшественников полимераз остаются связанными со скелетом, в котором, по-видимому, и локализуется активная форма полимеразы. Белки везикул в основном (но не полностью) остаются связанными с остовом после обработки детергентом; возможно, они участвуют в изменении архитектуры клетки.
Рис. 11.5. Электронно-микроскопические фотографии залитого эпоном среза клеток HeLa, обработанных детергентом. А. Незараженная клетка. Б. Ранняя стадия полиовирусной инфекции. В н Г. Поздние стадии полиовирусной инфекции.
Электронная микроскопия интактных зараженных клеток оказалась не очень информативной; удалось лишь установить, что цитопатический эффект, который наблюдается у зараженных клеток, включает образование многочисленных маленьких везикул, содержащих зрелые вирионы [19]. Несколько более информативной была одна из ранних работ на срезах, залитых эпо-ном, цель которой состояла в исследовании обработанной детергентом скелетной основы зараженных клеток. В этой работе были выявлены некоторые последствия вирусной инфекции для цитоскелета [31]. После удаления растворимых белков стала видна (хотя и не так четко, как в случае незалитых срезов) сильно перестроенная сеть филаментов. Примеры таких срезов представлены на рис. 11.5. Заметны значительные нарушения промежуточных филаментов, а на апикальных проекциях видно, что они коллапсируют на ядро. Как и ожидалось, большинство связанных со скелетом полирибосом исчезло, поскольку вирус подавляет синтез белка клетки-хозяина. Вместо этого видны огромные полиовирусные полирибосомы, связанные с белковыми «обломками» мембранных везикул.
Вирус везикулярного стоматита — цитоплазматический РНК-содержащий вирус с оболочкой
Из разных классов вирусов, снабженных оболочкой, лишь один рабдовирус — вирус везикулярного стоматита (VSV) —был изучен с точки зрения его связей с цитоскелетом. Полярный характер почкования VSV и совершенно иное поведение в этом отношении вируса гриппа говорят о том, что механизмы транспорта нуклеокапсида в клетке весьма специфичны [43]. Однако стратегия, которой подчиняется репликация, сборка и почкование цитоплазматических вирусов, снабженных оболочкой, примерно одинакова.
VSV — это вирус, содержащий минус-цепь 42S-PHK, которая заключена в структуру, построенную из пяти белков. РНК связана с белками нуклеокапсида N и NS и с небольшим количеством высокомолекулярной РНК-полимеразы L [2, 20]. Белок матрикса М является наружным по отношению к нуклеокапсиду, но внутренним по отношению к вирусной оболочке. Наружная оболочка вируса формируется из G-белка и липидов клеточной плазматической мембраны. Сборка вируса осуществляется в строго определенной последовательности, при этом N-, NS- и L-белки, связываясь с РНК при формировании нуклеокапсида, присоединены к скелету. Затем капсид связывается с М-белком и вскоре «одевается» в плазматическую мембрану, в которую встроен <}-белок.
Предыдущая << 1 .. 131 132 133 134 135 136 < 137 > 138 139 140 141 142 143 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed