Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Контактное торможение роста, вероятно, является функцией субстратной (адгезивной) зависимости, а также клеточно — клеточного взаимодействия. Общее свойство субстратной зависимости утрачивалось после добавления 50—1000 мкг/мл альбумина или 10—20 мкг/мл трипсина (рис. 4; см. вклейку). Предполагали, что оба метода обработки эффективно модифицируют взаимодействия клеточной поверхности и субстрата, хотя клеточно — клеточное взаимодействие, вероятно, также нарушалось. Клетки не были способны к движению, как это наблюдалось в присутствии сыворотки. Поведение такой клеточной популяции четко и резко изменялось в безбел-ковой среде, но сходство с ^трансформированными родительскими клетками ограничивалось адгезивной зависимостью и правильной морфологией. Способность к движению не восстанавливалась, не была обнаружена также тенденция клеток перекрываться или подползать под соседние клетки, наблюдаемая в культурах трансформированных и нетрансформированных клеток ЮТ 1/2 в присутствии сыворотки (Bell, 1977).
Другое свойство, наблюдаемое в культивируемых клетках ЮТ 1/2, в сбалансированной среде, указывающее на более нормаль-
165
ный фенотип,— это развитие в них больших перннуклеарпых телец с последующим округлением и выделением отдельных клеток с поверхности. Фиксированные 10 %-ным формалином или 2,5 %-ным глютаральдегидом и окрашенные масляным красным О культивируемые клетки микроскопически имели признаки жировой конверсии (рис. 5, вверху, вклейка), совершенно сходной с конверсией, наблюдаемой в фибробластах линии ЗТЗ мышей (Green, Meuth, 1974; Green, Kehinde, 1975) (рис. 6, см. вклейку). При культивировании в присутствии низких концентраций сыворотки (2,5 %) клетки возвращались к типичному неконтролируемому росту, хотя в цитоплазме отдельных клеток наблюдалось накопление жировых телец (рис. 5, внизу, вклейка). Нейтральные липиды экстрагировали из клеток in situ в чашках Петри (диаметром 60 мм) с использованием смеси изопропанол : гептан (0,73 : 0,27) и разделялись с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле в смеси петролейный эфир : этиловый эфир : уксусная кислота (80 : 30 : 1). Как видно на рис. 7 (см. вклейку), в полученных гелях, окрашенных 12, обнаружено присутствие нескольких фракций со значениями Rf от 0,03 до 0,25 и двух мажорных фракций со значениями 0,76 и 0,87 для культур клеток с добавлением (без конверсии) и без добавления Ш0 % + конверсия) сыворотки (5 %). Вероятно, что фракции 0,3— 0,25 и 0,87 представляют собой глицериловые эфиры, содержание которых повышено в некоторых линиях культивируемых клеток (Wood, 1973). Одна фракция определялась только в культурах с гистологически определяемой жировой конверсией, и эта фракция эмигрировала с триглицеридными стандартами при значениях R/0,63—0,65.
Кривая включения (14С)-ацетата в нейтральные липиды в культурах с гистологической конверсией имела пик при 124 пмоль (14С)-ацетата/108 клеток/час. Хроматографическое разделение нейтральных липидов показало, что 14С включался в две раздельно мигрирующие фракции со значениями R/0,35 и 0,55—0,60. Последняя фракция мигрировала с триглицеридным стандартом и окрашивалась масляным красным О (рис. 8). Возможно, что ацетат использовался п синтезе свободных жирных кислот (СЖК), алкилглицерил-лфиров и триглицеридов, которые аккумулировались в запасных каплях в цитоплазме. По-видимому, это нельзя объяснить «жировой дегенерацией» этих клеток (см. Moskovitz, 1967, где даются пространные рассуждения о концепции жировой дегенерации in vitro). Следовательно, важно определить, сходно ли это накопление липидов с дифференцировкой адипоцитов или с простым цитоплазматическим накоплением липидов, источником которых, возможно, являются дегенерировавшие клетки в культурах. Последнее наблюдается нередко и часто приводит к характерным морфологическим изменениям, не отличимым от жировой конверсии клеток ЗТЗ, но этот процесс всегда обратим. Tomei и Wenner (1978) сообщали о таких наблюдениях в следующем плане: 1) клетки, в которых началось накопление липидов, не вступали в митоз и не были способны к субкультивированию; 2) липиды синтезировались de novo из (14С) -ацетата и появлялись во фракциях, эмигрировавших с жирными
166
Рис. 8, Изучение распределения 14С в культурах клеток СД-Т-10Т 1/2, обработанных (иС)-ацетатом в течение 20 ч с помощью тонкослойной хроматографии. Fla 7—10-й день в культуры добавлялся 1 мкКи ацетата (43 Ки/моль), через 20 ч культуры промывались и фиксировались формалином. Липиды экстрагировались смесью метанол : хлороформ : вода (2:1: 0,8) (Kates, 1972) и хроматографировались па силикагеле, как описано на рис. 7. Триглицеридный стандарт (оливковое масло) определялся с помощью окрашивания в парах Ja. 14С определялся в сегментах 1 см, в результате чего выявлены два основных пика при значениях Uf 0,35 и 0,58 (0,55—0,60). Только фракция при 0,58 окрашивалась масляным краевым О.
тУ? фра таи
кислотами и триглицеридами; 3) фракции нейтральных липидов, эмигрировавшие с триглицеридами, появлялись только в культуре клеток с гистологической конверсией и отсутствовали, когда кон* версия не наблюдалась.
