Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Сообщение о том, что повышенное поглощение сахара клетками мышей, трансформированными ДНК-содержащими опухолеродными вирусами, можно объяснить повышением фосфорилирования (Romano, Colby, 1973), оспаривалось Kletzien и Perdue (1974). Вероятно,
12 5-1329
161
интерпретация Romano и Colby может быть также объяснена изменениями транспортного механизма. Romano и Colby неправильно расценили быстрое появление свободной 2-дезоксиглюкозы в клетке как показатель скорости транспорта и предположили, что, поскольку «равновесная концентрация» внутриклеточной свободной 2-дезокси-глюкозы была одинаковой в неинфицированных и трансформированных клетках, различия в поглощении сахара были обусловлены уровнем фосфорилирования. Однако кинетика зависит от исходного уровня, а не от «равновесных концентраций» (Cletzien, Perdue, 1974).
В культивируемых куриных эмбриональных фибробластах под влиянием таких веществ, как фенол и грамицидин, наступают изменения гликолиза, сходные с изменениями, индуцированными вирусной трансформацией (Fagan, Racker, 1978). Км гликолиза для глюкозы уменьшался примерно в 10 раз, a Vmax транспорта гексоз повышалась в 4 раза. Эти наблюдения показывают, что скорость утилизации клеточной энергии оказывает регулярное влияние на транспорт гексоз. До сих пор не ясен механизм, с помощью которого энергетический статус мог бы контролировать транспорт гексоз.
Недавно в одной из работ сравнивалась глюкозосвязывающая фракция, выделенная из культур нормальных куриных фибробластов, с фракцией, выделенной из куриных фибробластов, трансформированных вирусом саркомы Рауса (Lee, Lipmann, 1977). Значение экстрагированного связывающего фактора при определении было примерно в 2,5 раза выше в трансформированных клетках по сравнению с нормальными фибробластами, а значение поглощения глюкозы было выше в трансформированных клетках, чем в нормальных.
Также было показано, что добавление хроматографически выделенного транспортного белка стимулировало транспорт в нормальных клетках, а нетрансформированных (Lipmann, Lee, 1978). В клетках, растущих при низких концентрациях глюкозы или фруктозы, фактор стимулировал поглощение глюкозы в 7—10 раз, а в некоторых случаях — до уровня трансформированных клеток. Кроме того, добавление транспортного белка индуцировало формирование (14С)-де-зоксиглюкозо-6-фосфата в такой же степени, в какой оно стимулировало транспорт (14С)-дезоксиглюкозы. Этот очищенный связывающий белок представлял собой фракцию с молекулярной массой 73 ООО Д с примесью предполагаемых его мономеров (18 ООО Д).
Мажорный гликопротеин, выделенный из вируса миелобластоза птиц, также оказывал сходный стимулирующий эффект на транспорт глюкозы и гликолиз в нормальных фибробластах, но в клетках, трансформированных RSV, наблюдался слабый ответ (Papamathe-akis, Marciani, 1979). Кроме того, в покоящихся нормальных фибробластах, стимулированных насыщающим количеством сыворотки, отмечено дальнейшее угнетение 2-дезоксиглюкозы при обработке этим вирусным белком, В результате этих наблюдений предполагают, что гликопротеин может действовать на систему, являющуюся одновременно мишенью для действия сывороточных факторов.
162
5.3. КЛЕТОЧНАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ И ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ЭКСПРЕССИЯ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА
5.3.1. Реверсия к нормальному фенотипу клеток, трансформированных температурочувствительным мутантом вируса саркомы мышей
Недавно проведенные исследования температурочувствительных мутантов позволили сделать прямое сравнение нормальных и трансформированных фенотипов одних и тех же инфицированных клеток. В исследованиях Singer и соавт. (в частности, Ash et al., 1970; Carroll et al., 1978) определены свойства, характерные для клеток, трансформированных в результате использования температурочувствительного мутанта вируса саркомы Рауса, где возникает меньше вариантов, связанных с проблемами селекции клеток. Изученные трансформированные клетки имели следующие свойства: усиленный гликолиз, беспорядочное распределение внутриклеточных гладкомышечных миозиноподобных молекул, способность в этих клетках поверхностных молекул — рецепторов для КонА — формировать кластеры при обработке КонА. При изучении таких температурочувствительных мутантов наблюдали, что определенные структурные характеристики трансформированного фенотипа могут быть обратимы при введении ингибиторов синтеза белков в клетки, растущие при пермиссивной температуре.
Carroll и соавт. (1978) поставили вопрос, является ли реверсивность нормального фенотипа при угнетении белкового синтеза в этих клетках плейотипной и может ли она быть истинной не только для структурных, но и для обменных характеристик. В качестве показателя состояния метаболизма клетки они избрали аэробный гликолиз. Было обнаружено, что в инфицированных клетках при пермиссивной температуре уровень гликолиза повышается, что характерно для трансформированного статуса. Кроме того, было показано, что введение ингибиторов белкового синтеза, таких, как абрин или циклогексимид, оказывало обратный эффект на уровень гликолиза, наблюдаемого при непермиссивной температуре. Таким образом, реверсия от трансформированного к нормальному фенотипу была показана не только на морфологии клетки, структуре внутриклеточных миозиновых нитей и подвижности рецепторов КонА, но также на аэробном гликолизе. Таким образом, можно заключить, что реверсия от трансформированного к нормальному фенотипу, индуцированная ингибитором белкового синтеза, является плейотипной, т. е. вовлекает более чем один структурный и метаболический параметр.
