Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
6 4,1 126 103 31 25,7 (0,83)
10 5,5 91 66 16,5 12,0 (0,73)
17 6,6 134 120 * 20,3 18,2 (0,89)
1 Цифры в скобках представляют отношение: обработанные оубаином клетки/контроль. Клетки инкубировались, как показано па рис. 1.
и нуклеиновых кислот существенно не влияют на интенсивность гликолиза.
При более подробном анализе ранних исследований культивируемых клеток можно заметить, что во многих случаях условия культивирования были недостаточно установлены. Поскольку они могут влиять па наблюдаемый ответ, необходимо точно их определить (например, время последнего обновления среды, плотность посева и т. п.), чтобы получить сопоставимые результаты. Так, мы наблюдали, что уровень гликолиза в клетках СЗИ-10Т понижается после логарифмической фазы роста (табл. 1). Далее, O’Brien и соавт, (1979) сообщили, что концентрация лактата в среде постоянно уменьшается после того, как клетки мышей BALB/c ЗТЗ достигают состоя' ния сплошного монослоя. Когда опыты проводились в четко установленные промежутки времени, также были обнаружены различия чувствительности к ингибиторам, таким, как оубаин.
В опытах Carroll и соавт. (1978) угнетение оубаином аэробного гликолиза клеток NRK в одной серии опытов было незначительным, в то время как в другой серии опытов с клетками того же типа наблюдалось угнетение продукции лактата примерно на 40%. Мы также наблюдали цикличность угнетения оубаином поглощения 86Rb+ клетками ЗТЗ, которая зависела от времени взятия образцов в течение логарифмической фазы роста культур (Moroney et al., 1978).
5.2.2. Фосфофруктокиназа — ключевой энзим в метаболическом контроле гликолиза
Исследование нарушений равновесия интермедиатов гликолиза указало на фосфофруктокиназу как фактор, лимитирующий интенсивность аэробного гликолиза. Rozengurt и соавт. (1977) измеряли активность фосфофруктокиназы клеток ЗТЗ до и после трансформации вирусом SV40 или вирусом полиомы. Они обнаружили, что индуцированный вирусом высокий уровень продукции лактата продолжался после гомогенизации клеток и различие трансформированных вирусом клеток и их гомогенатов по сравнению с нормальными выра-
160
К ГЛАВЕ 3
Риг. 2. Ультрапруктурные характеристики клеток ьрыгппои СО глиомы перед (а) и после (б) трех часовой обработки 20 мМ глюкоза-мина. И обработанных клетках наблюдается фрагментации :>ндопла;*-магического ретику л ума, выпячивания наружной мембраны ядер и митохондрии, увеличение вазикул и комплекса Гольджи, а также снижение содержания полисом, х 21318. Репродукция из Friedman,
Skehan (1980).
11 5-1329
К ГЛАВЕ 9
Микр('фотографии эпителиальных плеток молочной железы мышеи в первичных культурах: а — нормальной ткани; б — мредопухолсиых узлов, IIAN; в — опухоли. Фазовый контраст, X 40.
К ГЛАВЕ 12
Изображение лиофилизированного нефиксированного сроза двенадцатиперстной кишки мышей. Внизу микрофою показаны мышечные волокна (М). Видны гранулы клеток Пане1а (Р), соединительнотканые эле--менты собственно мембраны (С) и митотический хроматин (MX) делящихся энтероцитов.
жалось повышением активности фосфофруктокиназы. Эти авторы предположили, что высокий уровень образования лактата в большей Степени обусловлен нарушением гликолиза, чем нарушением транспорта глюкозы. При трансформации могут возникать нарушения транспорта сахаров, однако это само по себе не может быть причиной повышенного образования лактата, так как последнее сохраняется в бесклеточных гомогенатах. Подкреплением предположения, что транспорт гексоз не ограничивает гликолиз, являются данные Christopher и соавт. (1978), показывающие, что в нормальных и трансформированных эмбриональных куриных фибробластах концентрация внутриклеточной глюкозы выше, чем глюкозо-6-фосфата и гексоки-назы.
Исследования Singh и соавт. (1974, 1976) показали, что активность гексокиназы и фосфофруктокиназы не является ограничивающим фактором для гликолиза: активность этих ферментов гораздо выше, чем исходный уровень гликолиза в нормальных и трансформированных клетках. Эти изменения могут быть адаптивными и возникать в результате ускорения начальных реакций, протекающих с использованием энергии, как это предположили Fagan и Racker (1978). Несомненно, преимущество таких адаптивных изменений заключается в том, что они, вероятно, обеспечивают с помощью аллостериче-ской регуляции ферментов большую приспособляемость клетки к ее изменяющимся потребностям в АТФ при трансформации.
5.2.3. Изменения транспорта сахаров, связанные с малигнизацней
Вирусная трансформация клеток животных в культуре вызывает рост числа молекул, обладающих транспортной активностью, особенно сахаров, в связи с чем Holley (1975) и Pardee (1974) предположили, что эти изменения транспорта являются первостепенными для освобождения злокачественных клеток от контроля роста.
Многочисленные сообщения о том, что в клетках, трансформиро ванных вирусом, повышается поглощение глюкозы, были объяснены повышенным транспортом сахара (Kletzien, Perdue, 1974; Hata-naka, 1974}. В этих работах показано, что транспорт глюкозы и ее аналогов — 2-дезоксиглюкозы и З-О-метилглюкозы повышается в 3— 4 раза в клетках с морфологическими изменениями, характерными для вирусной трансформации, или в 2 раза — для температурочув ствительного мутанта вируса саркомы Рауса TS-68. Вычисление констант кинетики транспорта глюкозы по диаграммам Лайнуивера — Бэрка показало, что Vmax была более чем в 2 раза выше при пермис-сивной температуре, а Км не изменялась, что согласуется с интерпретацией, объясняющей повышенный транспорт эа счет увеличения числа транспортных сайтов.
