Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Результаты предыдущих исследований, полученные в нашей лаборатории, продемонстрировали, что в клетках китайских хомячков клеточные пулы растворимых цАМФ-зависимых протеинкиназ увеличивались в то время как синхронизированные клетки проходили через GrB S-фазу (Costa et al., 1957). Это увеличение активности и количества энзима коррелировало с изменениями уровня внутриклеточного цАМФ и активацией растворимых цАМФ-зависимых протеинкиназ (Costa et al., 1975). Последовательно мы определили, что специфические формы этих энзимов — тип II — индуцировались в
149
Рис. 5. Тип I и тип II цАМФ-зависимой протеинкиназы в течение Gx прогрессии нормальных и трансформированных клеток. Покоящиеся клетки RatJ (а) и трансформированные Rail клетки (б) были стимулированы добавлением свежей, содержащей сыворотку среды. В указанное время клетки экстрагировали и хроматографировали.на ДЕАЕ для определения размеров пулов киназы типа I (0) и типа II (О) (из работы Haddox et al.T
1980а).
течение перехода из Gx в S-фазу (Costa et al., 1975), и эта индукция происходила в постоянно циклирующих клетках так же, как и в покоящихся клетках, стимулированных к пролиферации (Costa et al., 1978).
Оригинальная модель Pardee (1974) привела к предположению, что вирусные трансформирующие функции действовали в некоторых точках ограничения в Огфазе, чтобы ослабить или модифицировать регуляцию роста, сравнимую с ^трансформированными клетками. В дальнейшем, эта точка совпадала с точкой действия, наблюдаемой для ингибирования роста аномально высокими уровнями экзогенного цАМФ (Pardee, 1974). Byus и соавт. (1977) установили, что ингибирование роста лимфоцитов цАМФ привело в результате к активации последовательности типов цАМФ-зависимых протеинкиназ. Haddox и соавт. (1980а) недавно подтвердили эти данные и продемонстрировали, что это происходит в нормальных и трансформированных вирусом саркомы Рауса клетках Rati. Было интересно обнаружить, что эти трансформированные фибробласты, обладающие значительно сниженным требованием к сыворотке для роста клеток и репликации ДНК (Magun et al., 1979), имели также повышенные уровни цАМФ-зависимой протеинкиназы типа II (рис. 5). Значения уровня этого энзима в трансформированных клетках, лишенных сыворотки или стимулированных сывороткой, такие же. В лишенных сыворотки трансформированных клетках наблюдались уровни, более чем в 4 раза превышающие уровни в лишенных сыворотки нормаль-
150
Таблица 2* Стимулированный дибутирил-цАМФ-синтез типа I и обмен типа П цАМФ-зависимой протеинкиназы в клетках Rati и Rati (wt/RSV)
Эксперимент Синтез цАМФ-зависимых протеинкиназ
нмоль/мин/10« клеток
Тип 1 | Тип II | Тип f/тии Г1
Клетки Rati
Покоящиеся 102 132 0,77
Сыворотка 134 262 0,52
+ циклогексимид 84 120 0,70
-f- актиномицин Д 64 82 0,78
Сыворотка -j- дибутирил-цАМФ 274 94 2,92
+ циклогексимид 104 30 3,47
+ актиномицин Д 190 24 7,92
Сыворотка + 8-бром-цАМФ 340 92 3,70
Клетки Rati (wt/RSV)
Покоящиеся 300 710 0,42
Сыворотка 225 640 0,35
Сыворотка -(- дибутирил-цАМФ 415 120 3,45
+ циклогексимид 236 51 4,63
+ актиномицин Д 488 171 2,85
Сыворотка + 8-бром-цАМФ 402 107 3,76
Примечание. 1. Покоящиеся клетки Rati и Rati (wt/RSV) или клетки, инкубированные в течение 8 ч после добавления свежей, содержащей сыворотку среды в присутствии 1 мМ дибутирил-цАМФ, 8-бром-цАМФ, 25 мкг/мл циклогексимида или 10 Мкг/мл актино-мицина Д, были экстрагированы и хроматографированы на ДЕАЕ для определения размеров пула киназы типов I и II. Данные, представленные из работы Haddox н соавт. (1980).
ных культурах, в то время как уровни киназы типа II в нормальных клетках, стимулированных сывороткой, достигают таких же значений в трансформированных клетках. Обнаружены только незначительные различия уровней протеинкиназы типа I нормальных и трансформированных или лишенных сыворотки клеток по сравнению с уровнями энзима стимулированных сывороткой клеток. Табл. 2 (Haddox et al., 1980а) демонстрирует, что эффект дибутирил (Bt2)-цАФМ одинаков в нормальных и трансформированных RSV фибро-бластах, в период их действия на экспрессию I и II типов цАМФ* зависимой протеинкиназы. Соотношение типа I к типу II цАМФ-за-висимых киназ минимально в пролиферирующих клетках, не зависимых от трансформации. Ингибирование роста клеток в результате лишения сыворотки или действия ВЦ-цАМФ приводит к существенному увеличению этого соотношения, достигая значений, превышающих приблизительно в 10 раз значения нормально пролиферирующих клеток.
