Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
143
Время после 'стимуляции, ч
менялась свежей средой без сыворотки при t « 0, то сходные индексы метки были обнаружены 30 ч спустя для клеток Rati и Ratl(RSV). В условиях свежей или старой среды без сыворотки 10 или 40 % ДНК реплицировалось через 30 ч в клетках Rati и Ratl(RSV) соответственно.
Упомянутые выше эксперименты указывают на то, что нетранс-формированные клетки, блокированные с содержанием ДНК, характерным для &!-фазы, стимулируются свежими питательными веществами (исключая сыворотку) для продвижения по направлению к границе Gi/S. Возможно, эти клетки становятся заблокированными в ранней S-фазе. Клетки Ratl(RSV) блокировались в среде без сыворотки ближе к границе Gx/S (см. рис. 3) и могут быть остановлены в точке ограничения ранней S-фазы. Важное различие не-трансформированных и трансформированных RSV линий заключается в том, что трансформированные клетки способны выйти за точку ограничения в отсутствие сыворотки, в то время как нетрансформи-рованные клетки обязательно нуждаются в сыворотке для преодоления точки ограничения. Как упоминалось прежде, трансформированные ДНК-содержащими опухолеродными вирусами клетки имеют сниженную способность входа в покоящееся состояние, но, будучи остановленными, не обладают повышенной способностью к усколь-ванию (Martin, Stein, 1976). Как установлено в нашей лаборатории, трансформированные ДНК-содержащими опухолеродными вирусами клетки входят в покоящееся состояние в отсутствие сыворотки, но имеют более высокую вероятность выхода из этого состояния по сравнению с нетрансформированными клетками. Интересно, что не-трансформированные клетки намного более чувствительны к сывороточным факторам, чем трансформированные клетки. В следующем разделе мы рассмотрим сывороточные факторы и чувствительность ^трансформированных и трансформированных клеток.
4.3.2.3. Клетки, трансформированные химическими канцерогенами
Изучение клеточной трансформации в клетках под влиянием опухолеродных вирусов имеет то преимущество, что трансформированный фенотип обусловлен действием продукта единичного гена. Однако заключения, полученные в подобных исследованиях, должны смягчаться пониманием того, что большинство злокачественных новообразований человека является результатом индукции, вызванной химическими канцерогенами (Heidelberger, 1977). Очевидное неудобство использования химически трансформированных клеток заключается в том, что их «трансформированный» фенотип различен в подобных популяциях. Следовательно, становится трудным обобщать молекулярные изменения, встречающиеся в химически трансформированных клетках, так как такие трансформированные клеточные линии отличаются одна от другой различными путями индукции.
O'Brien, Diamond (1977) обнаружили, что нормальные и трансформированные бенз(а)пиреном эмбриональные клетки хомячка за-
144
держивали свой рост при достижении плотности. Добавление свежей сыворотки было достаточным, чтобы стимулировать синтез ДНК в обоих клеточных типах через 6 ч. Holley и соавт. (1976) сравнили ответы на сыворотку клеток ЗТЗ и их трансформированных бенз(а)-пиреном и 8У40-аналогов. Нетрансформированные и трансформированные бенз(а)пиреном клетки останавливали рост при высокой плотности и низком содержании сыворотки (0,2 %). Однако химически трансформированная линия обнаруживала сниженную потребность в сывороточном факторе роста типа ростового фактора фибробластов. Как упоминалось в разделе 3.2.2, трансформированные SV40 клетки ЗТЗ не задерживали свой рост.
Moses и соавт. (1978) сравнили характер роста линий, выделенных из мышиных эмбриональных клеток, с двумя линиями, трансформированными 3-метилхолантреном. Все клеточные линии останавливали свой рост после достижения высокой плотности. Стимуляция клеток добавлением свежей среды с 10 % сыворотки приводила к индукции синтеза ДНК во всех клеточных линиях, однако в химически трансформированных клетках эта индукция наблюдалась после значитель- ' но более короткого lag-периода. Однако ни сывороточный, ни эпидермальный, ни фибробластный ростовые факторы не были способны стимулировать трансформированные клетки. По-видимому, покоящееся состояние, наблюдаемое в трансформированных клеточных линиях, явилось результатом существенного истощения аминокислот или других питательных веществ низкой молекулярной массы скорее, чем истощения макромолекулярных сывороточных факторов.
4.3.3. Продукция ростовых факторов трансформированными клетками
Пролиферация клеток в культуре, как было установлено, зави~ сит от присутствия макромолекулярных факторов роста в сыворотке (Holley, Kiernan, 1968; Temin, 1971). Хотя многие факторы роста, включая факторы роста эпидермиса, нервов, фибробластов, тромбоцитов и сомы, были идентифицированы и выделены из сыворотки, эпидермальный фактор роста (ЭФР) — биологически наиболее активен и лучше всех указанных факторов изучен (Carpenter, Conen,
1978).
Регуляция пролиферации культивируемых фибробластов ЭФР изучалась интенсивно в последние несколько лет (Carpenter et al., 1976а; Cohen et al., 1975; Hollenberg, Cautrecasas, 1973, 1975) no следующим причинам: ЭФР — один из нескольких известных ми-тогенов, большое количество (мг) которого можно получить в чистой форме, необходимой для культуральных и радиорецепторных исследований, в которых 100-кратное превышение немеченого гормона требуется для определения специфичности связывания; многие линии фибробластов и их химически и вирус-трансформированных дериватов использовались в качестве модельных систем для исследования зависимого от плотности ингибирования и роли сывороточных
