Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Одна из наиболее постоянных особенностей трансформированных клеток заключается в повышенной плотности клеток in vitro по сравнению с их нетрансформированными аналогами. В противоположность ^трансформированным аналогам клетки, трансформированные ДНК-содержащими опухолеродными вирусами, такими, как SV40, не останавливают свой рост в Gx-фазе. Вместо этого они блокируются через клеточный цикл или продолжают пролиферировать до тех пор, пока не отлипают от подложки или погибают (Paul, 1973; Prescott, 1976; Pardee, 1974; Bartholomew et al., 1976). Время удвоения числа нетрансформированных клеток ЗТЗ при концентрации сыворотки ниже 8 % настолько удлинялось, что далее оставалось неизмеряемым, однако трансформированные SV40 клетки имели время удвоения, увеличивающееся только в два или три раза при концентрациях сыворотки от 4 до 1 % (Bartholomew et al., 1976).
Martin, Stein (1976) осуществили эксперименты, используя клетки CHL, трансформированные SV40 и термочувствительным мутантом вируса A-типа (ts А239). Истощение сыворотки приводило к блоку нетрансформированных клеток, в то время как трансформированные диким типом вируса или термомутантом ts А239 клетки при пер-миссивной температуре откреплялись от подложки. При непермис-сивной температуре клетки ts А239 напоминали по своему поведению нормальные клетки. Сдвиг от непермиссивной температуры к пермис-сивной остановленных в росте клеток ts А239 приводил к началу синтеза ДНК более чем за 1,5 дня. Авторы предположили, что трансформированные SV40 клетки были дефектны не только по их способности оставаться в покоящемся состоянии, но и по их способности входить в фазу покоя.
4.32.2. Клетки, трансформированные PIIК-содержащими опухолеродными вирусами
Клетки, трансформированные РНК-содержащими опухолерод-иыми вирусами, отвечают на сывороточные факторы не так, как клетки, трансформированные ДНК-содержащими опухолеродными вирусами. Для того чтобы изучить действующий контроль сыворотки в трансформированных РНК-содержащими опухолеродными вирусами клетках, мы сравнивали нетрансформированные Rati клетки и трансформированные (Rati wt/RSV) так же, как мы это делали с клетками L А24, трансформированными термочувствительными мутантами вируса саркомы Рауса (Rati ts RSV). Нетрансформиро-
140
ванные Rati клетки имели укороченное время удвоения, составляющие 12,5 ч по сравнению с клетками Rati (wt/RSV) — 15,5 ч (см. рис. 1). Кроме того, клетки Rati достигают более высокой плотности популяции по сравнению с трансформированными клетками Rati. Последнее свойство является результатом закисления среды и лизиса клеток, которые наблюдаются в культурах Rati (wt/RSV) при высокой плотности. Однако трансформированные клетки достигали более высокой плотности насыщения, чем нетрансформированные, когда продолжительно проводилось дополнительное питание культуры (данные не показаны). Как показали результаты проточного микрофлюориметрического анализа (см. рис. 2), клетки Rati, так же как и Rati (wt/RSV), останавливались в Gx-фазе клеточного цикла вслед за истощением сыворотки. Однако скорость синтеза ДНК в покоящихся, лишенных сыворотки клетках Rati (wt/RSV) была выше (0,8 % в час), чем в нетрансформированных клетках Rati (0,2 % в час) (Magun, Bowden, 1980). Такие значения скорости синтеза ДНК определяли измерением количества меченой 14С ДНК, реплицирующейся вслед за сывороточной стимуляцией через различные интервалы времени до 30 ч. Процент вновь реплицируемой ДНК определялся по сдвигу плотности нормальной ДНК в сторону плотности гибридной ДНК как результат инкорпорации метки в тяжелую плотность (Magun et al., 1979; Magun, Bowden, 1980). Когда лишенные сыворотки клетки Rati и Rati (wt/RSV) стимулировались добавлением сыворотки, обе клеточные линии начинали синтезировать ДНК через 8—10 ч после добавления сыворотки, но общая скорость синтеза ДНК была выше в нетрансформированных клетках Rati — И % в час, чем в клетках Rati (wt/RSV) — 4 % в час (Magun et al., 1979). В том же исследовании клетки Rati, трансформированные термочувствительным мутантом RSV, вели себя как трансформированные клетки при пермиссивной температуре (35 °С) и как нетрансформированные клетки при непермиссивной температуре (30 °С). Общая скорость синтеза ДНК была значительнее при более высокой температуре, чем при низкой. В противоположность результатам, полученным при исследовании трансформированных SV40 клеток (Martin, Stein, 1976), лишенные сыворотки клетки Rati (wt/RSV), содержавшиеся при 39 °С, а затем при 35 °С, начинали синтезировать ДНК через 12 ч с максимальной скоростью подобно клеткам Ratl(wt/ RSV) (Magun et al., 1979). Температура 35 или 39 °G не изменяла скорости синтеза ДНК в клетках Rati или Rati (RSV). Следовательно, трансформированные клетки более чувствительны к сывороточным факторам, так как в присутствии сыворотки скорость пролиферации этих клеток и вероятность их вхождения в S-фазу были выше. Результаты сравнения вероятности вхождения в фазу синтеза ДНК клеток Rati и Rati (wt/RSV), лишенных сыворотки, показаны на рис. 3. Лишенные сыворотки клетки были стимулированы сывороткой в присутствии 8Н-тимидина для того, чтобы получить кривую Smith — Martin вероятности прохождения по циклу, полученную с помощью радиоавтографического анализа. В то время как клетки Rati (RSV) входят в S-фазу раньше, чем клетки Rati (определено
