Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
89
5,3. Анализируя пептидные карты полипептидной части каждого белка, установили, что они идентичны. Гликопротеид сильно гидро-фобен и не растворим в водных растворах без детергентов. Гликопеп-тидная связь чувствительна к щелочному боргидриду, что указывает на ее возможное отношение к связям «муцинового типа», которые присоединяют олигосахаридные цепи сериновыми или треониновыми остатками полипептидной цепи (Cook, 1976).
В настоящее время сиаломуцин поверхности опухолевых клеток представляет определенный интерес, во-первых, потому что он может быть выделен в чистом виде в относительно большом количестве для структурного анализа (Codington et al., 1975а; Carraway et al., 1979; Carraway, Sherblom, 1979), во-вторых, потому что его появление в опухолях коррелирует с изменением свойств клеточной поверхности (Carraway et al., 1978; 1979; Codington et al., 1978; Huggins et al., 1979) и способностью опухолей к перевивкам (Godington et al., 1978; Huggins et al., 1979).
Было бы интересным изучить, подобен ли структурно и функционально гликопротеид, описанный Stoddart и Price, другим «опухолеспецифическим» сиаломуцинам. К тому же, исследования биосинтеза белков, имеющих pi 4 и 3,8, могли бы дать информацию, играет ли роль гликозилирование белков в процессах, с помощью которых гликопротеиды локализуются в специфических клеточных мембранах.
3.2.22, Эпигликанин
Эпигликанин — стержнеобразной формы сиалогликопротеид с высокой молекулярной массой, который находится на поверхности мембран аллотрансплантируемой мышиной ТАЗ аденокарциномы молочной железы, а также в сыворотке и асцитной жидкости мышей-опухоленосителей (Cooper et al., 1974). Интерес к этигликанину возник в связи с его предполагаемой ролью в маскировке антигена гистосовместимости (Sanford et al., 1973; Codington et al., 1975). Gasic, Gasic (1962) впервые показали, что ТАЗ-На — спонтанная опухоль молочной железы — содержит на поверхности клеток высокую концентрацию сиалогликопротеидов. Впоследствии в лаборатории Codington обнаружено, что при протеолизе жизнеспособных клеток появляется фракция гликопротеида с высокой молекулярной массой, содержащая много N-ацетилгалактозамина, галактозу, сиаловую кислоту, серин и треонин. Они назвали эту фракцию эпигликанин (Codington et alM 1975а). Обнаружено, что эпигликанин может инги* бировать агглютинацию эритроцитов, индуцированную лектинами семян V. graminea (Springer et al., 1972), которые высокоспецифичны к В-Gal—GalNac—O-Ser (ТЬг)-последовательностям, присутствующим в детерминантах N-типа крови человеческих эритроцитов (Unlenbruck и Dahr, 1971). Тот факт, что эпигликанин специфически связывается лектином, дает возможность увеличить чувствительность метода его определения, основанного на адсорбции лектинов (Cooper et al., 1974), позиоляя в асцитной жидкости и сыворотке мышей-опухоленосителей обнаружить такое незначительное количество
30
лектиносвязывающих сайтов, как 500 клеток ТАЗ-На и нанограммы энигликанина. Фрагменты энигликанина, приготовленные с помощью протеолиза поверхности опухолевых клеток и 1гель-фильтрационной хроматографии, содержат смесь гликопротеидов с молекулярной массой 80—460 кД и гетерогенным углеводным составом. Разнород ность результатов возникает вследствие различий соотношения пропорций пяти различных типов О-гликозидных связей олигосахаридных цепей, составляющих основную часть углеводной части эпиг-ликанина (Codington et al., 1975а). Эпигликанин, сбрасываемый с поверхности опухолевых клеток в асцитную жидкость мышей, был очищен и с помощью электронной микроскопии было обнаружено, что он состоит из молекул длиной 450—500 нм и молекулярной массой выше 500 кД. Приблизительно 75—80 % молекул углеводов находятся в 500—600 олигосахаридных цепях, соединенных О-гликозидной связью с сериновыми и треониновыми остатками полипептидного скелета, содержащего 1300 аминокислот. Наличие небольшого количества маннозы позволяет предполагать, что несколько цепей могут находиться в N-гликозидной связи с аспарагиновыми остатками (Slayter, Codington, 1973; Codington et al., 1975a; 1978).
Эпигликанин содержит приблизительно 60 % сиаловых кислот клеточной поверхности (Codington, 1978), большинство из которых доступны для нейраминидазы (Miller et al., 1977). В работе (Codington et al., 1975) установлено, что 109 клеток ТАЗ-На содержит 2,3 мг этого гликопротеида, а в одной клетке имеется около 5 млн. молекул. Эпигликанин не определяется на поверхности мембран клеток нормальной ткани мышей (Codington et al., 1975). Биологические функции энигликанина исследовались путем сравнения характеристик роста клеток штамм-неспецифических асцитных сублиний (ТАЗ-На, ТАЗ-MM) с гибридными клонируемыми линиями, полученными в результате слияния ТАЗ-На с нормальными эмбриональными фибробластами сингенных мышей (линия A) (Codington et al., 1978; 1979; Cooper et al., 1979) или клетками сублинии TA3-St. Обе линии, ТАЗ-Па и ТАЗ-St, были штамм-специфическими и перевивались только сингенным мышам. Однако после продолжительного пассирования путем внутрибрюшинных перевивок клетки ТАЗ-На теряли штамм-специфичность и могли перевиваться на чужеродных мышей. Линия клеток ТАЗ-MM возникла в связи с небрежностью, допущенной в течение ранних пассажей ТАЗ-St в организм мышей. В результате клетки были инфицированы Pasteurella pneumotropica и Pastenrella mul-tocida. Как показано в табл. 1, эти сублинии различаются по некоторым биологическим свойствам. С помощью таких линий доказана предполагаемая ранее функциональная роль энигликанина в алло-генной перевиваемости ТАЗ-На. В культуре клеток ТАЗ-На как эпигликанин, так и способность к аллотрансплантации исчезали одновременно после нескольких недель роста и снова появлялись при пассировании клеток как асцитных опухолей мышей (Miller et al.,
