Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
1974). Фракции, которые элюируются первыми при гельфильтрации на колонках, обычно содержат большие, более разветвленные, чем фракции, элюированные позднее, олигосахаридные цепи (Glick, 1974; Ogata et al., 1976) и обогащенные общими нейраминидазочувст-вительными остатками сиаловых кислот (Warren et al., 1977). Поверхностные гликопептиды немалигнизированпых тканей и клеточных линий, которые относятся к [^трансформированным, в отличие от гликопептидов малигнизированных тканей выходят при хроматографии одним пиком, содержащим олигосахаридные цепи (небольших размеров), остатки сиаловых кислот которых защищены от действия нейраминидазы (Warren et. al., 1977).
Предполагается, что обогащение сиаловыми кислотами гликопептидов — характерная особенность трансформированных клеток (Van Beek et aL, 1973; Warren et al., 1975, 1977; Warren et al., 1975;
1977). Противоречивые данные, полученные в нескольких лабораториях, дают возможность считать это предположение чрезмерно обобщенным. Быстрорастущие W1-38 клетки имеют гликопептидный состав, характерный для трансформированных клеток, хотя их онко-генная трансформация не была обнаружена (Ceccarini, 1975). В дополнение к этому оказалось, что не все клетки в трансформированных культурах содержат высокий уровень сиалогликопегттидов, хотя в некоторых случаях при перевивке этих клеток животным возникали и росли опухоли (Glick et al., 1973). Сходные изменения обнаружены и на ранних пассажах опухолевых клеток (Shiu et al., 1977).
Обогащение сиаловыми кислотами, по-видимому, не связано с другими фенотипическими признаками, которые описаны для трансформированных клеток, растущих in vitro, включая изменения поведения роста (Glick et al., 1973; Smets et aL, 1976) и состава клеточной поверхности (Lage-Davila et al., 1979). Увеличение активности специфических ферментов — сиалилтрансфераз сопутствовало появлению повышенного количества сиалогликопептидов в быстрорастущих нетрансформированных и трансформированных клеточных куль-
82
турах (Warren et al., 1972). Сиалилтрансферазы находятся на поверхности клетки и мембран эндоплазматического ретикулума. Они катализируют перенос сиаловых кислот на десиалинизированные эндогенные акцепторы. Ввиду того что данные, представленные большинством исследователей, о содержании и активности сиалилтранс-фераз получены с использованием экзогенных акцепторов, содержание которых часто снижается в процессе трансформации (Wu et al., 1969; Grimes, 1970; 1973; Makita, Seyama, 1971), кажется вероятным, что трансформационно- и ростзависимое увеличение сиалогликопеп-тидов происходит только в небольшой популяции гликопептидов мембран в связи с появлением специфических сиалилтрансфераз, описанных Warren и сотрудниками (Warren et al., 1972).
При оценке возможной взаимозависимости увеличения сиали-рования гликопептидов и онкогенной трансформации или малигни-зации необходимо учитывать ограничения и артефакты методик, вид получаемой информации. В большинстве случаев клетки метаболически метились введением за один или более дней радиоактивных глюкозамина или фукозы. В дальнейшем меченые поверхностные гликопептиды выделялись из интактных клеток мягкой трипсиниза-цией, подвергались жесткой обработке проназой, удаляющей все, кроме нескольких аминокислот, и анализировались с помощью гель-фильтрационной хроматографии, распределяющей олигосахаридные цепи по размерам. Артефактные изменения в гликозилированных образцах могут возникать в связи с неправильным выбором условий для включения метки и трипсинизации, использованием клеток, находящихся в различных пролиферативных состояниях. Количественные и качественные нарушения включения меченых сахаров в гликопептиды могут возникать в результате изменений клеточных систем, взаимопревращения сахаров или обобщения размеров эндо-генносинтезированных нуклеотидных сахаров (Gurchenco et al.,
1978). Всякий раз при проведении сравнительных исследований клеток, пребывающий в различных физиологических и патологических состояниях, и обнаружении различий их меченых образцов необходимо было бы учитывать, что эти различия могут быть обусловлены метаболизмом сахаров. К сожалению, такого типа анализ не проводился в большинстве исследований, представленных в литературе. Для того чтобы максимально пометить гликопептиды и избежать артефактов, связанных с неустойчивым состоянием процесса включения метки, культуры клеток инкубировали с мечеными сахарами от одного до нескольких дней. Для многих типов культивируемых клеток скорость роста популяции не может оставаться постоянной в течение периода включения метки (Skehan, 1976; Skehan, Friedman, 1979; 1980).
Не было обнаружено влияние скорости роста на состав и структуру гликопептидов в нескольких исследованиях, представивших данные о сравнении растущих и нерастущих культур. В связи с рос* том найдены изменения количества сиаловых кислот в фукозосодер-жащих гликопептидах (Warren et al., 1972; Glick, Buck, 1973; Buck et a]., 1974), структуры олигомаинозильных ядер нейтральных
6*
83
гликопептидов (Ceccarini et al., 1975) и хроматографического поведения кислых гликопептидов, которые возникали из-за структурных изменений, не связанных с содержанием сиаловых кислот олигосахаридных цепей (Ceccarini et al., 1975),
