Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
сы 2 20 18 90 Fujita (1928)
Лейкоциты
крысы 2,0 15,0 13,0 86,3
Среднее
Стандартная 0,5 2,5 2,2 3,3
ошибка <0,005 <0,005 НЗ <0,005
Значение
Примечание. 1 Продукция молочной кислоты определялась манометрически и выражалась в микролитрах газа, выделяющегося из бикарбонатного буфера и приходящегося на миллиграмм сухой массы ткани за час. Абсолютный пастеровский эффект — разница между аэробными и анаэробными условиями. Относительный эффект — процентное сниж**-ние продукции кислоты между анаэробными и аэробными условиями. Значение определялось по тесту t Стьюдента при сравнении трансформированных и нормальных популяций. НЗ — незначительно,
331
вообще или он достаточен только для беспрепятственного прохождения клетки через клеточный цикл? Без стимуляции лимфоциты периферической крови в течение длительного периода существуют в вегетативном состоянии (Gtj) (Fitzgerald, 1964; Epstein, Stohlman, 1964). Добавление какого-либо митогена или антигена стимулирует их пролиферацию (Oppenheim, 1968). Стимуляция пролиферации лимфоцитов — ценная система исследования контроля клеточного роста. Одним из самых ранних процессов, возникающих после обработки лимфоцитов ФГА, является резкое повышение интенсивности аэробного гликолиза с последующим (через несколько часов) началом синтеза ДНК и белков (MacHaffie, Wang, 1967; Pachman, 1967; PoJgar et al., 1968). Результаты исследований показывают, что для индуцированной митогеном пролиферации лимфоцитов необходима повышенная интенсивность гликолиза.
Подобный феномен также наблюдается на фибробластах. Лишение сыворотки приводит к прекращению роста мышиных фибробластов ЗТЗ, по не клеток ЗТЗ, трансформированных вирусом SV40, или спонтанно трансформированных клеток ЗТ6 (Romano, Colby, 1973). Добавление сыворотки к нормальным клеткам стимулирует их пролиферацию. При изучении контроля роста система фибробластов аналогична системе лимфоцитов в том отношении, что оба вида клеток могут быть переведены из фазы G0 в пролиферативное состояние путем добавления факторов извне. После добавления сыворотки к нормальным клеткам ЗТЗ один из первых процессов — повышенная интенсивность потребления глюкозы (Colby, Romano, 1975; Weber, 1973). И в этой системе угнетение гликолиза 2-дезоксиглюкозой предупреждает стимуляцию роста. В трансформированных клетках гликолиз проходит активно даже в отсутствие сыворотки (Hassell etal.,1975). Для фибробластов ЗТЗ показана четкая корреляция потребления сахара и пролиферации.
Rubin и сотрудники более детально исследовали потребление глюкозы в связи с клеточным циклом с использованием эмбриональных куриных фибробластов. Они показали, что стимуляция клеточного роста сывороткой, повышение pH или трансформация RSV приводят вначале к повышенной продукции лактата с последующим (через несколько часов) началом синтеза ДНК (Fodge, Rubin, 1973). Также стимулируются потребление глюкозы и фосфорилирование (Rubin, 1971), но эти факторы, по-видимому, не ограничивают интенсивность гликолиза, поскольку продукция лактата повышена даже в отсутствие экзогенной глюкозы (Fodge, Rubin, 1975). Угнетение гликолиза 2-дезоксиглюкозой, NaF или йодоацетатом предупреждает повышение интенсивности синтеза белков и ДНК (Rubin, 1971; Rubin, Fodge,
1974). Эти наблюдения полностью соответствуют наблюдениям Temin (1971). Из описанных выше исследований становится ясно, что для перехода клеток из вегетативного в пролиферативное состояние необходимы гликолиз сам по себе или продукция какого-то интермедиата гликолиза.
332
11,6.3. Внутриклеточное pH и гликолиз
Влияние повышения pH на стимуляцию роста и гликолиз, описанные выше (Fodge, Rubin, 1973), вполне закономерны. Как изложено в предыдущих разделах, существуют определенные значения внутри-и внеклеточного pH, оптимальные для роста клеток. Влияние pH окружающей среды на интенсивность гликолиза в клетках опухолей было впервые показано Warburg (Warburg et al., 1924). Результаты более поздних исследований, проведенных Fodge и Rubin (1973) в фибробластах и Minakami и сотрудниками (1975) в эритроцитах, показали, что интенсивность гликолиза повышается с повышением значения экстраклеточного pH с 7,0 до 8,0 и что опухолевые или трансформированные клетки менее чувствительны к изменениям pH, чем нормальные. Эти наблюдения интересны в свете того факта, что pHt клеток асцитного рака Эрлиха менее чувствительно к изменениям рНе, чем в нормальных клетках. Последующие исследования внутриклеточного pH и его связи с гликолизом дали неожиданные результаты (рис. 4).
Первое сообщение было получено от группы Minakami, показавшей, что хорошо известное влияние осмотических изменений на гликолиз эритроцитов опосредуется только изменениями внутриклеточного pH (Tomoda et al., 1977). Качественно сходные результаты получила группа Shulman, которая одновременно определяла внутриклеточное pH и интенсивность гликолиза Е. coli с использованием ЯМР — 81Р (Ugurbil et al., 1978, 1979). Более недавние результаты, полученные группой Racker, показали зависимость внутриклеточного pH от гликолиза в клетках асцитного рака Эрлиха подобно тому, как это наблюдалось в отмеченных выше системах (Belt et al., 1979). Эти результаты неожиданны, так как клетки асцитного рака Эрлиха
