Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Эш Б.Б. -> "Трансформированная клетка" -> 18

Трансформированная клетка - Эш Б.Б.

Эш Б.Б., Билл П.Т., Камерон И.Л. Трансформированная клетка — К.: Наукова думка, 1985. — 384 c.
Скачать (прямая ссылка): transformirovannayakletka1985.djvu
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 211 >> Следующая

Клетки, растущие как солидные ткани или колонии, обычно проявляют замедление роста, при котором размер популяции достигает верхнего лимитирующего значения (Weiss, 1967; Yahara, Edel-man, 1972; McNutt, 1973). Истинный рост прекращается, когда достигается этот потолок. Каждый тип клеток имеет свой собственный верхний лимит, и этот лимит варьирует на несколько порядков в зависимости от типа клетки или ткани (Laird, 1969; Simpson-Herren, Lloyd, 1970; Steel, 1977). В единичной гелевой культуре объемы колоний широко варьируют, и даже слабые изменения, наблюдаемые в подсчете, могут привести к изменениям до двух порядков значений видимой КОА (Kakanuga, Kamahora, 1968). В сравнительных исследованиях адекватный критерий формирования колоний — то, что агрегаты, содержащие, по крайней мере, две клетки, рассматриваются как колонии. Любой другой критерий влечет за собой вероятность серьезного артефакта вследствие игнорирования большего процента маленьких колоний в одной клеточной линии по сравнению с другой. Многие видимые различия КОА, описанные в литературе для нормальных и туморогенных линий, почти определенно отражают скорее различия верхпего лимита размера колоний, чем действительной колониеобразующей активности.
2ЛЛЛ. Объем инокулята
Колониеобразующая активность чрезвычайно чувствительна к объему инокулята (Kakanuga и Kamahora, 1968; Dicke et al., 1971; Leavitt et al., 1977; Carlsson, 1978; Colburn et al., 1978; Knowles, Franks, 1978; Montagnier, Gruest, 1979).
Для большинства клеточных линий существует порог плотности инокуляции, ниже которого клеточная пролиферация и колониеобра-зование не происходят (Kakanuga, Kamahora, 1968; Dicke et al.f 1971; Leavitt et al., 1977; Montagnier, Gruest, 1979). Выше этого порога пролиферация наблюдается, однако КОА непостоянна и изме-
36
няется в зависимости от объема инокулята. Наблюдаемая КОА может повышаться или понижаться на несколько порядков с увеличением плотности посева (Astrup, Permin, 1947; Kakanuga, Kamahora, 1968; Dicke et al., 1971; Aden, Knowles, 1977; Colburn et al., 1978; Knowles, Franks, 1978; Montagnier, Gruest, 1979). Порог плотности для колоние-образования не связан с максимальной КОА, на которую способна клеточная линия при оптимальных условиях. Две клеточные линии могут обладать идентичным порогом, но весьма различным максимумом КОА, или наоборот (Kakanuga, Kamahora, 1968; Montagnier, Gruest, 1979). Основные недостатки многих сравнительных исследований по изучению КОА — оптимизация условий пробы для каждой клеточной линии и принятие некоторого стандартного критерия измерения, такого, как размер плато КОА при сверхмаксимальной плотности посева. В пробах на КОА плотность инокуляции в чашках диаметром 50 или 60 мм в большинстве случаев произвольна и колеблется от 10 до 10 млн. клеток на чашку (Giard et al., 1973; Mishra, Ryan, 1973; Evans, Di Paolo, 1975; McFarland et al., 1975; Aden, Knowles, 1977; Gallimore et al., 1977; Marshall et al., 1977; Steuer et alM 1977b; Colburn et al., 1978; Knowles, Franks, 1978; Barrett et al., 1979; Kahn, Shin, 1979). Совершенно иная плотность посева часто использовалась в различных экспериментах и, в некоторых случаях, для клеточных линий в единичном исследовании (Freedman, Shin, 1974; Berman, 1975; McFarland et al., 1975; Aden, Knowles, 1977; Gallimore et al., 1977; Marshall et al., 1977; Steuer et al., 1977, 1977b; Hince, Roscoe, 1978; Barrett et al., 1979). Сравнительные данные в таких исследованиях не легко интерпретировать.
Зависимость КОА от плотности посева указывает на то, что на способность формировать колонии влияют кооперативные взаимодействия клеток (Colburn et al., 1978; Knowles, Franks, 1978; Barrett et al., 1978; Montagnier, Gruest, 1979). Негативная кооперация, при которой КОА падает с увеличением плотности посева, по-видимому, отражает артефакт голодания, возникающий вследствие повышенного истощения среды клеточным потреблением при высокой плотности. Этот эффект может быть преодолен увеличением концентрации питательных веществ и сыворотки (Montagnier, 1969; Taylor et al., 1975; Carlsson, 1978; Colburn et al., 1978; Barrett et al., 1979). Механизмы, ответственные за позитивную кооперацию, менее определены. Montagnier и Gruest (1979) предположили, что позитивная кооперация может быть результатом продукции лабильного, способного к распространению фактора роста. Альтернативным объяснением может быть то, что с повышением плотности посева увеличивается протяженность клеточной агрегации до затвердения агара в суспензии (Carlsson, 1978; Skehan, Friedman, 1975; Wright et al., 1977). С субстрат-зави-симыми клетками повышенная агрегация может хорошо удовлетворять требованию клеток к субстрату внутри агрегата и, таким образом, приводить к увеличению КОА,
37
2.4.4М. Артефакты при истощении среды
Для клеточного роста внешние питательные вещества и концентрации сыворотки должны быть равны или превышать специфические пороговые значения (Eagle, 1959; Eagle et al., 1961; Griffiths, 1970; Pledger et al., 1977). Когда используются маленькие объемы среды или редко осуществляется ее замена, клеточное потребление может уменьшить уровни содеря^ания питательных веществ и сыворотки ниже порогов, необходимых для роста (Eagle et al., 1961; Griffiths, 1970; Holley, 1975). Снижение концентрации аминокислот на 10 % иногда достаточно для того, чтобы вызвать замедление роста (Griffiths, 1970). Хотя этот тип замедления роста наиболее выражен при высокой плотности популяции, он может наблюдаться в некоторых клеточных линиях в течение 24—48 ч после посадки дая^е при чрезвычайно низкой плотности (на порядок ниже значения, необходимого для сплошного монослоя) [Skehan, Friedman, 1978].
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 211 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed