Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Эш Б.Б. -> "Трансформированная клетка" -> 179

Трансформированная клетка - Эш Б.Б.

Эш Б.Б., Билл П.Т., Камерон И.Л. Трансформированная клетка — К.: Наукова думка, 1985. — 384 c.
Скачать (прямая ссылка): transformirovannayakletka1985.djvu
Предыдущая << 1 .. 173 174 175 176 177 178 < 179 > 180 181 182 183 184 185 .. 211 >> Следующая

11.3.2. Внеклеточное pH и клеточный рост
В течение уже многих лет известно, что экстраклеточное pH влияет на рост клеток (Fischer, 1925). Работами Mackenzie и сотрудников (1961), Ceccarini и Eagle (1971), Rubin (1971) определены опти-мумы внеклеточного pH роста различных типов клеток. Результаты исследований показали, что, размножаясь при оптимуме pH, нормальные клетки могут достичь такой же высокой плотности роста, как и их неопластические гомологи. Кроме того, клеточный рост тормозится резко в щелочной области значений оптимума pH и более постепенно — в кислой, что согласуется с взаимоотношением внутри- и внеклеточного pH, описанным в предыдущем разделе. Результаты дальнейших наблюдений показали, что неопластические клетки обычно имеют более кислый оптимум pH роста и менее чувствительны к изменениям pH окружающей среды, чем их нормальные гомологи (Eagle, 1973). Было установлено, что внеклеточное pH также сильно влияет на многие другие клеточные функции, такие, как клонабель-ность (Fischer, 1925; Eagle, 1973), дифференцировка (Carter, Nijhout,
1977), синтез специфических белков (Pfeiffer, Eagle, 1976; McKenzie et al., 1961; Nigra et al., 1973), сборка белков in vitro (Begg, Reb-hun, 1979; DeWit, Schaafsma, 1978), синтез вируса (Fields, Eagle* 1973) и его спасение (Calothy et al., 1973). У Tetrahymena скорость
324
Рис, 3. Скорость роста и внутриклеточное pH у Tetrahymena pyriforinis. Интенсивность роста и рН^ изменялись путем варьирования внеклеточного pH в отдельных опытах. Graph указывает на корреляцию параметров и не склонен объяснять это случайностью. Интенсивность роста выражена как величина, обратная удвоению времени в часах. Внутриклеточное pH определялось ^ с использованием ДМО в лог-фазе роста клеток в полной ростовой среде.
I
I
роста максимальна в диапазоне значений pH от 5,75 до 7,40. Как ранее упоминалось, внутриклеточное pH относительно постоянно при изменении наружного pH в том же самом диапазоне. На графике зависимости скорости роста клеток от внутриклеточного pH показан достаточно отчетливый оптимум внутриклеточного pH роста клеток (рис. 3). Однако до сих пор не ясно, определяется ли скорость роста внутриклеточным pH или же pH* поддерживается как постоянная величина в связи с оптимальными условиями роста. Необходимо дальнейшее исследование этого феномена в данной и других системах.
11.3.3. Органические кислоты и клеточный рост
Как указывалось ранее, клетки многих типов способны поддерживать внутриклеточное pH в пределах строгих границ при относительно широком диапазоне значений наружного pH. Способность поддерживать pH* существенно зависит от концентрации органических кислот (лактата) и углекислоты в среде. Эти кислоты являются конечными продуктами метаболизма и их концентрация в среде повышается с возрастом культуры (Eagle, 1971, 1973; Gillies, Dearner,
1980). Учитывая это, можно предсказать, что в суспензионных культурах рост клеток должен меньше зависеть от изменений pH окружающей среды, чем в плотных культурах. Rubin (1971) наблюдал этот феномен в куриных эмбриональных фибробластах и обнаружил,s что фибробласты, трансформированные вирусом SV40, имеют промежуточную чувствительность к изменениям рНе по сравнению с суспензионными и плотными культурами. Этому феномену можно дать много объяснений. Для более полной оценки механизмов влияния внеклеточного pH на рост клеток необходимо более детальное исследование взаимосвязи внутри- и внеклеточного pH, содержания органических кислот и роста.
325
В сотрудничестве с D. W. Deamer мы исследовали этот вопрос с использованием Tetrahymena — реснитчатого простейшего с быстрым ростом и хорошо описанными свойствами, качественно подобными свойствам клеток млекопитающих (Hill, 1972; Elliot, 1973; Stein, Blum, 1979). В более ранних исследованиях мы установили, что pH* поддерживается на постоянном уровне при рНе, изменяющемся в диапазоне, оптимальном для роста клеток (Gillies, Deamer, 1979). Недавно мы отметили, что концентрация НСОГ в среде повышается по мере роста культуры (Gillies, Deamer, 1980). Даже при постоянном встряхивании содержание НСОГ повышается до постоянной концентрации — 25 мМ, что сопровождается переходом в стационарную фазу. Поскольку в начале стационарной фазы источник пищи не истощается, о чем свидетельствует продолжающаяся продукция NH3, мы исследовали, достаточно ли добавления 25 мМ С02 для перегрузки системы, регулирующей pH, и остановки роста. Для тестирования культуру обрабатывали нелетучей слабой кислотой 5,5-диметилоксазолидин-2,4-дион (ДМО) и обнаружили аналогичную концентрацию и pH-зависимость остановки клеточного роста и удаления градиента pH. Использование DMO в качестве нелетучего аналога С02 подкрепляется также наблюдениями Roos (1975). Дальнейшая обработка, уменьшающая содержание С02 в среде растущих культур, приводила к шестикратному увеличению плотности роста культур, находящихся в стационарной фазе. Результаты показывают, что у Tetrahymena высокие концентрации метаболически образующихся слабых кислот могут привести к независимости роста клеток от pH. Проявление этого феномена в клетках других типов пока еще не исследовалось.
Предыдущая << 1 .. 173 174 175 176 177 178 < 179 > 180 181 182 183 184 185 .. 211 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed