Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
3*Z3*1Q”r
Тс-т^Ю^сек
?:б,1*10~7смх/сек
2
313
mMPCAOL
MMPCAOL
6
Рис. 5. Показатели исследований нормальных и трансформированных SV40 клеток ЗТЗ с помощью спин-меток. Как показано, были сравнены три типа нормальных клеток ЗТЗ с их трансформированными вирусами гомологами по изменениям диффузионных свойств спин-меток в цитоплазме в зависимос!и от их концентрации. Использовали клетки ЗТЗ в стационарной фазе роста при плотности около 3—4 X 104/см2. При такой же плотности брали делящиеся клетки и SV40 ЗТЗ: а — Swiss ЗТЗ и Swiss SV40 ЗТЗ были получены из лаборатории A. Mastro; б — BALB/c ЗТЗ и SV40 получены от R. Scott* в — BALB/c ЗТЗ и SV40 получены от P. Beall.
эксперименте было обнаружено уменьшение вязкости в цитоплазме этих клеток по сравнению с нормальными (см. рис. 8,в). В обоих экспериментах, проведенных с нормальными клетками, получены одинаковые значения этого показателя. Хотя можно найти несколько типов нормальных и трансформированных клеток, у которых обнаруживаются различия вяэкости и диффузии спин-меток в цитоплазме, эти признаки не будут универсальными. Они скорее будут характеризовать отличие одного клона клеток от другого.
В
314
Обнаруженные нами факты поддерживают выводы Skehan и Friedman (см. гл. 2), где они указывали на то, что, возможно, состав цитоскелета клеток нормальных и трансформированных линий не очень различается. Если же существует различие, мы не будем предсказывать, что структура цитоплазмы как нормальных, так и трансформированных клеток будет оказывать одинаковое влияние на их молекулярное окружение.
10.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В ходе изложения настоящего материала установлено, что спин-метки являются удобным инструментом для исследования физического состояния цитоплазмы. Предложена соответствующая рабочая модель для определения молекулярных параметров, которые определяют возможности диффузионных процессов. Достаточные усилия были сделаны, чтобы проиллюстрировать полезность метода. Однако ясно, что предложенная рабочая модель очень приближенно напоминает цитоплазму. Хорошо известные феномены, такие, как текучесть и тиксотропные свойства, переходы раствор — гель в некоторых клетках, демонстрируют явную сложность цитоскелета. Такие процессы должны оказывать влияние на перемещение растворенных веществ в цитоплазме.
В этой главе продемонстрировано, что увеличение диффузии в цитоплазме наступает после обработки клеток цитохолазином В. Эти результаты наводят на мысль, что потеря клеткой микрофила-ментов приводит к уменьшению диффузионных барьеров. Подобные изменения вязкости цитоплазмы обнаружены при такой обработке в клетках, находящихся в состоянии покоя или роста. Обнаружено, что колцемид не оказывал заметного влияния на вязкость цитоплазмы, хотя он препятствует сборке микротрубочек.
Конечно, общая цель этой книги — выявить различия между трансформированными и нормальными делящимися клетками. С помощью метода спин-меток были обнаружены различия, однако они не способствовали решению поставленной задачи. В одних клетках трансформированных линий диффузия спин-меток была несколько снижена, в других несколько повышена. Поэтому не была обнаружена какая-либо общая закономерность изменений диффузии спин-меток в трансформированных клетках.
Эта работа частично поддерживалась Службой Исследований Военно-Морского флота (00014-79-С-0253). Мы благодарим Mr. М. Babich за помощь по включению спин-меток в клетки.
10.5. УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ
Anisimov С. АNikitaev А. T.f Zamaraev Я. Molin У. М. (1971). Separation of exhange and dipole-dipole broadening on the basis of viscosity changes inESR spectra. Theor. Eksp. Khim. 7, 682—686.
Barnett R. E.f Grisham С. M. (1972). Spin exchange of spin labeled probes in a natural membrane. Biochem. Biophys. Res. Commun. 48, 1362—1366.
Beall P. Т., Hazlewood, С. F., Rao R. /V. (1976).Nuclear magnetic resonance patterns of intracellular water as a function of HeLa cell cycle. Science 192, 904—* 907.
315
Berliner L. ed. (1976). «Spin Labeling Theory and Applications». Academic
Press, New York.
Devaux P. McConnell H. Af. (1972). Lateral diffusion in spin-labeled phosphatidylcholine multilayers. J. Am. Chem. Soc. 94, 4475—4481.
Devaux P,, Scandella C. /., McConnell tf. M. (1973). Spin-spin interactions between spin-labeled phospholipids incorporated into membranes J. Magn. Reson. 9, 474—485.
Eastman M. P., Bruno G. V.Freed /. tf. (1970). ESR studies of Heisenberg spin exchange. II. Effects of radical charge and size. J. Chem. Phys. 52, 2511—2522.
Freed /. tf. (1966). On Heisenberg spin exchange in liquids. J. Chem. Phys. 45, 3452—3453.
Goldman /?., Pollard TRosenbaum Jeds. (1976). «Celi Motility», Cold Spring Harbor Conference on Cell Proliferation. Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, New York.
Hammerstedt RAmann Rucinsky T., Morse P., LepockJSnipes IV., Keith A .
