Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Эш Б.Б. -> "Трансформированная клетка" -> 173

Трансформированная клетка - Эш Б.Б.

Эш Б.Б., Билл П.Т., Камерон И.Л. Трансформированная клетка — К.: Наукова думка, 1985. — 384 c.
Скачать (прямая ссылка): transformirovannayakletka1985.djvu
Предыдущая << 1 .. 167 168 169 170 171 172 < 173 > 174 175 176 177 178 179 .. 211 >> Следующая

10.3.2. Подвижность спин-меток в клетках млекопитающих
Перемещение спин-меток в цитоплазме клеток ВНК при комнат^ ной температуре в условиях изотонической среды свидетельствует о приблизительно трехкратном уменьшении вращательной подвижности и чуть меньше, чем двукратном уменьшении трансляционной диффузии по сравнению с движением в воде (рис. 5).
'HzOtc-MSxfO-**
>fl300rc-0j6*iQ'ne
/ У А P!OOtc '0.38* W T%
-0A8*10'№g
PS tc =0,51 *Ю'!0с P2lc*UW'”c
Ю 20
ММ PCA3L
JO
311
MM PCAOL
Рис. 6. Действие цптохалазина В на подвижность спин-меток в клетках ВНК. Одни клетки были обработаны 5 мкг/мл среды цитохалазином В в 0,4%-ном ДМСО за 5 ч до включения в них спин-меток. Другие клетки ©брабатыва л и только 0,4 % -ным
ДМСО, третьи не обрабатывали. Обработка клеток ДМСО не оказывала влияния на подвижность спин-меток. PCAOL использовали в концентрациях, обозначенных на оси абсцисс. Показаны средние значения результатов пяти отдельных опытов. В таких экспериментах с ЗТЗ-клетками были получены аналогичные резуль-
ММ PCAOL
Рис. 6. Влияние фазы роста на подвижность спин-меток в ЗТЗ-клет-ках. ЗТЗ-клетки находились в стаци-онариой фазе роста в среде с 5%-ным содержанием сыворотки. Увеличение содержания сыворотки до 10 % в некоторых культурах стимулировало переход клеток в Gj-фаяу. Клетки собирали для введения спин-меток спустя 12 ч после стимуляции сывороткой. PCAOL использовали в концентрациях, показанных на ©си абсцисс. Представлены средпие данные четырех отдельных экспериментов.
таты. Контроль ВНК (•), цитохала-8ИН В (о), н20 (-).
Во всех клетках млекопитающих было обнаружено ограничение в большей степени вращательного, чем продольного перемещения спин-меток. Мы ожидали обратное исходя из результатов экспериментов с полиакриламидом. Цитохалазин В разрывает микрофиламенты в интактных клетках. Когда клетки ВНК были обработаны цитохалазином В, они имели круглую форму. Измерение движения спин-меток в таких клетках показало, что увеличивается значение ?*sl> свидетельствующее о снижении числа препятствий для диффузии спин-меток в клетках, обработанных цитохалазином В (рис. 5). Мы наблюдали такой эффект действия цитохалазина В, как в клетках ВНК, так и ЗТЗ, но не в клетках ЗТЗ, трансформированных SV40. Когда покоящиеся конфлюэнтные ЗТЗ-клетки стимулировали добавлением в среду сыворотки, они значительно изменяли свою мор-
312
Рис. 7. Влияние осмотического давле- Q5 ния на подвижность спин-меток в ВНК-клетках. Спнн-метка TEMPONE, которая использовалась в эгих аксперимен-тах, была синтезирована из полностью деитерированных предшественников.
Эта спин-метка имела необычно малую g «** ширину линии, что позволяло точно оп- Ч ределять изменения ширины линии при ее конценграпии в 10 мМ. Все определения Dsl были выполнены при концен- О, трации метки в 10 мМ, а тс — при 1 мМ.
Клетки суспендировали в различном количестве NiCl2 в соответствии с указанными на оси абсцисс значениями гипертонических условий среды.
фологию. Мы изучили перемещение спин-меток в стимулированных сывороткой клетках ЗТЗ в поздней Gj-фазе клеточного цикла. Физиологические и структурные изменения, происходящие в клетках при переходе их из состояния покоя к делению, стимулируемому сывороткой, связаны со снижением микровязкости цитоплазмы, в некоторой степени более низким по сравнению с наблюдаемым при обработке клеток цитохалазином В (рис. 6).
Изменение осмотического давления среды вызывает сморщивание или набухание клеток. В гипертонической среде также происходит модификация внутриклеточного диффузионного окружения (рис. 7). В этих условиях Z>sl изменяется в 2 раза, а тс только на 18 %. Полученные данные показывают, что препятствия для диффузии становятся ближе друг к другу, так как в результате изменений осмотического давления размер клетки уменьшается.
Установлено, что клетки трансформированных линий имеют менее организованную цитоплазматическую сеть. В связи с этим мы исследовали подвижность спин-меток в трансформированных клетках и в их нормальных нетрансформированных гомологах. Мы обнаружили различия диффузионных свойств спин-меток в цитоплазме нормальных и трансформированных клеток. Было исследовано три типа нормальных ЗТЗ-клеток (два — мышей BALB/c и один — Swiss) и их трансформированных SV40 гомологов. Проведено сравнение диффузии спин-меток в этих нормальных и трансформированных клетках в стационарной фазе роста или спустя 12 ч после стимуляции их сывороткой. Мы полагали, что если существуют различия показателей диффузии нормальных и трансформированных клеток ЗТЗт то они наиболее выражены в стационарной фазе роста. Действительно, были обнаружены некоторые различия этих показателей в клетках Swiss, ЗТЗ и SV40-3T3 (см. рис. 8, а). В нормальных клетках микроокружение спин-меток имело меньше ограничений, чем в трансформированных. Это показали результаты трех отдельных экспериментов. Однако в других типах нормальных и трансформированных клеток диффузионные свойства спин-меток практически не отличались (см. рис. 8, б). Только в третьем типе трансформированных клеток ЗТЗ в одном эксперименте было обнаружено увеличение вязкости по сравнению с нормальными клетками (см. рис. 8Д в). В повторном
Предыдущая << 1 .. 167 168 169 170 171 172 < 173 > 174 175 176 177 178 179 .. 211 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed