Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
показателя для нормальных и опухолевых клеток. В 45 исследованных индивидуальных образцах не было случая, чтобы значения Тх опухолевых клеток и нормальных перекрывались, и только в пяти случаях такое наблюдалось в клетках, полученных из ткани молочной железы, находящейся в предопухолевом состоянии. Существенных различий гидратации нормальных и опухолевых (р > 0,3) или нормальных и предопухолевых клеток (р > 0,7) не наблюдалось.
Средние значения Тх и Т2 для предопухолевых клеток в первичных культурах занимают промежуточное положение между таковыми для опухолевых и нормальных клеток. Значения Тх для первичных культур, полученных из предопухолевых узлов и растущих
13—14 нед., были подобны таковым для первичных культур, полученных из 16—17-недельных трансплантатов узлов даже примерно через 19 нед., в период появления опухолей. Это может свидетельствовать о том, что в разные периоды роста ткань предопухолевых узлов (HAN) не постепенно перерождается в опухолевую, а резко, спонтанно. Для того чтобы эти исследования были более исчерпывающими, полученные для первичных клеточных культур данные сравнивали со значениями Тг и Т2 для трех стабильных клеточных линий опухоли молочной железы мышей, которые серийно пассировали в культуре более чем три года (Butel et. al., 1977). Все три линии имели более низкие значения 7\, Т2 и процент Н20, чем первичные культуры (табл. 7). Из полученных данных можно сделать два важных вывода. Во-первых, даже для стабильных клеточных линий, если отложить на графике 11ТХ против отношения массы воды к массе твердого вещества, мы не получим монотонной линии, свидетельствующей о наличии взаимоотношений этих показателей (которую
20*
291
Таблица 7. Время релаксации протонов воды, измеренное методом ЯМР в стабильных клеточных линиях молочной железы мышей
Линия п* Г, ± SE (мс)1 Ta ± SE (мс) Н.О (%)
ESD/BALB CL3 5 632 ±8 1138±8 85 ±0,7
MTV-L/BALB CL2 8 762±26 105±5 83,9 ±0,7
DMBA/BALB CL2 5 739±33 109±8 83,8±0,2
Примечания: п1 число образцов; (мс)а — время релаксации и % Н,0 представлены как средние значения ± SE стандартное отклонение.
надо было бы ожидать, если бы различия значений показателей ЯМР были обусловлены только отличиями степени гидратации). Во-вторых, три стабильные линии отличались друг от друга, хотя все они были производными мышиной аденокарциномы молочной железы. В связи с этим не совсем корректно сравнивать стабильные опухолевые клеточные линии с нормальными первичными культурами, используя последние в качестве контроля. В случае таких экспериментов стабильные линии опухолевых клеток должны иметь значения Тг и Т2 более низкие, чем «нормальные» клетки.
Некоторые авторы (Economou et al., 1973; Floyd et al., 1975; Hollis et al., 1973; Inch et al., 1974) полагают, что механизм, объясняющий увеличение значений Тх и Т2 для воды раковых клеток,— повышение гидратации опухолевой ткани (по отношению к нормальной ткани). Так как в настоящее время существует множество статей, в которых показано, что Тх в тканях животных и человека находится в прямой взаимосвязи с отношением массы воды к массе сухого остатка тканей (Ranade et al., 1976; Kasturi et al., 1976; Changhule et al., 1974a,b) и клеток (Beall et al., 1976a, b; Wagh et al., 1977), такое представление все еще часто используется для объяснения наблюдаемых в тканях опухолей фактов. Результаты настоящего исследования показывают, что различия значений 7\ и Т2 для нормальных, опухолевых и предопухолевых клеток имеются даже тогда, когда не существует различий их гидратации.
Трансформированные фибробласты, когда находятся в смешанной с нормальными клетками культуре, могут быть определены или отделены от находящихся рядом нетрансформированных фибробластов с помощью таких критериев, как размер или форма, окрашива-емость, утрата зависимого от плотности клеток торможения клеточного деления и перекрестного перемещения при образовании многослойных фокусов, пролиферация при низкой концентрации сыворотки, приобретение способности роста в полужидком агаре или метилцеллюлозе (Tooze, 1973). В противоположность этому поиск маркеров, с помощью которых можно идентифицировать или отобрать предопухолевые клетки в отдельности или вместе с опухолевыми эпителиальными клетками молочной железы из их нормальных двойни-ков, оказался длительным, затрудняющим выполнение основной задачи. Как суммировано в табл. 6, не обнаружены различия, ко-
292
торые могли бы быть необходимыми для использования в определении ускорения или ингибирования роста или различий жизнеспособности одних типов клеток и популяций по сравнению с другими. Более того, большинство характеристик скорее относится к клеточным популяциям, чем к отдельным клеткам. В связи с тем что исследуемые показатели представляют средние значения популяции клеток, часто трудно точно интерпретировать полученную информацию, так как неизвестны количественные или качественные вариации, которые имеются в той или другой клетке. Например, как много клеток в популяции владеет определенными признаками? Какие качественные или количественные различия имеются среди клеток? Если не одинаково выражен конкретный признак во всех клетках популяции, что же определяет различия, которые мы установили? Эти проблемы особенно сложно решить при работе с молочной железой, так как ее ткань представляет гетерогенную популяцию эпителиальных клеток. Полностью дифференцированная молочная железа содержит помимо стромальных и сосудистых клеток, такие, как фибробласты, липо-циты и эндотелиальные клетки, три типа эпителиальных: дукталь-ные, альвеолярные, миоэпителиальные. Установлено, что в HAN присутствуют альвеолярные и миоэпителиальные клетки, тогда как тип клеток, из которых впоследствии образуются опухоли и которые преобладают в них, не известен. Маркеры, которые позволяют идентифицировать три типа нормальных эпителиальных клеток молочной железы в различных условиях in vivo и in vitro, не способны определить роль и дальнейшую судьбу этих клеток в течение дисплазии и опухолеобразования в молочной железе.
